Estudios estructurales en la enzima RibD de la bacteria patogénica Brucella abortus

POTH L; BONOMI HR; GOLDBAUM FA; CERUTTI ML; KLINKE S

Bahía Blanca, Provincia de Buenos Aires

Encuentro; VI Taller y XIII Reunión Anual de la Asociación Argentina de Cristalografía; 2017

Asociación Argentina de Cristalografía

La brucelosis es una enfermedad de los animales originada por bacterias del géneroBrucella, la cual es endémica en Argentina generando cuantiosas pérdidas económicasprincipalmente por abortos e infertilidad en el ganado bovino. La brucelosis puede transmitirseal hombre dando lugar en muchos casos a una fase crónica debilitante que afecta diversosórganos reduciendo notoriamente la calidad de vida del paciente. Hasta el momento no existeuna vacuna contra la brucelosis humana como así tampoco ningún tratamiento 100% efectivo.Como patógeno intracelular, Brucella depende en forma exclusiva de la riboflavina(vitamina B2) que sintetiza en forma endógena. La ausencia de esta ruta metabólica enmamíferos hace que las enzimas involucradas en la biosíntesis de esta vitamina sean blancosatractivos con potencial terapéutico [1]. La enzima bifuncional Fosforibosilamino PirimidinaDeaminasa/Fosforibosilamino Pirimidina Reductasa (RibD) de Brucella abortus cataliza dosreacciones consecutivas en la biosíntesis de riboflavina. La primera reacción es unadeaminación catalizada por el dominio Citidina y Desoxicitidilato Deaminasa (CDD) y lasegunda reacción es una reducción catalizada por el dominio RibD_C.En este trabajo se presentarán los resultados obtenidos hasta el momento que tienen comofin último la determinación de la estructura tridimensional tanto de la enzima completa como lade sus dominios constituyentes, en ausencia y presencia de ligandos. En una primera instanciase efectuó el clonado de la proteína completa (39 kDa) y el de los dominios CDD y RibD_C porseparado (15,7 y 24,2 kDa, respectivamente) y se hicieron tests de expresión de las proteínascorrespondientes. El dominio RibD_C fue purificado con uso de FPLC y cristalizado por mediode un robot de cristalización Honeybee963. Las condiciones evaluadas en el robot quepresentaron crecimiento cristalino fueron optimizadas. En este momento estamoscomenzando con los tests de difracción.En líneas generales, el proyecto busca generar la mayor cantidad posible de informaciónestructural de la enzimas participantes en la ruta de la riboflavina en Brucella abortus para eldiseño de inhibidores con potencial terapéutico [2].[1] A. Bacher et al, (1996). Biochemical Society transactions 24, 89-94.[2] M. Serer et al., (2014). Acta Cryst D70, 1419-1434.