Estudio de los requerimientos de la proteína de cápside del virus del dengue para la encapsidación y el desnudamiento del virussimple cadena de polaridad positiva de ap

BYK, L; IGLESIAS, N.G.; SAMSA, M.M.; GAMARNIK, A.V.

CABA

Congreso; XI Congreso Argentino de Virología; 2015

El virusdel dengue (DENV) es el patógeno viral humano transmitido por mosquito de mayorimportancia a nivel mundial, infectando a más de 400 millones de personas cadaaño. Es un virus envuelto con un genoma a RNA simple cadena de polaridadpositiva de aproximadamente 11 Kb. Contiene un solo marco abierto de lectura elcual es traducido en una poliproteína que es procesada co ypost-traduccionalmente dando lugar a 10 proteínas, 3 de las cuales sonestructurales: cápside, prM y E.  El virusingresa a la  célula hospedadora por unmecanismo de endocitosis mediada por receptor, el cual involucra la unión de Ea un receptor celular. Luego de la internalización, la fusión de la membranaviral con la membrana endosomal permite la liberación de la nucleocápside alcitoplasma. El desnudamiento viral involucra la disociación de la cápside delRNA. Por otro lado durante la morfogénesis de las nuevas partículas virales laproteína de cápside debe asociarse al RNA para formar la nueva nucleocápside.Los procesos de desnudamiento y encapsidación que involucran ambos a laproteína de cápside y el genoma viral ocurren por mecanismos aún desconocidas. Laproteína de cápside posee un peso molecular de 12 kDa,  es altamente básica y forma un homodímero ensolución. Cada monómero está formado por cuatro alfa hélices y los primeros 20aminoácidos no poseen estructura definida en solución. En este trabajo examinamos losdeterminantes de la proteína de cápside del virus del dengue necesarios para laencapsidación y el desnudamiento. Un análisis mutacional sistemático utilizandoun sistema de virus reportero indicó que se requiere la presencia deaminoácidos básicos en el extremo amino terminal y en el centro de la alfahélice 4 para la formación de partículas infectivas. A partir de estos estudioselaboramos un modelo de interacción cápside RNA.  Por otro lado se identificaronaminoácidos específicos que redujeron levemente la producción de partículas viralespero que afectaron drásticamente la infectividad viral. De esta formaidentificamos requerimientos específicos que nos permiten disociar los procesosde encapsidación y desnudamiento. Por último, pudimos detectar y estudiarla  cinética de la proteína C que ingresaa la célula durante la infección. Nuestros resultados indican que tanto C comoel genoma viral son degradados luego de la internalización, y que ladegradación de C es dependiente de la actividad del proteasoma.