CONICET | Buscador de Institutos y Recursos Humanos

Malaria continua siendo un problema importante de para la salud pública mundial. Cinco especies son capaces de provocar la enfermedad en el hombre, siendo Plasmodium falciparum la más extendida y letal. El aumento de la resistencia de este parásito a las terapias en uso impone la necesidad de desarrollar nuevas drogas dirigidas contra nuevos blancos. Las Falcipaínas (Fps), cisteíno proteasas involucradas en la degradación de hemoglobina, se destacan como candidatos prometedores; en particular Fp2, que adicionalmente interviene en la ruptura de los eritrocitos facilitando la salida del parásito [1]. Considerando el enorme potencial de los productos naturales como fuente de compuestos para el desarrollo de drogas y la biodiversidad existente en la plataforma insular de Cuba [2], en este trabajo se desarrolló una estrategia de tamizaje de actividad inhibidora en extractos acuosos de 42 especies de invertebrados marinos cubanos pertenecientes a distintos Phyla, usando Fp2 recombinante como enzima blanco. La estrategia contó con un tamizaje primario empleando técnicas tradicionales de cinética enzimática y un segundo tamizaje confirmatorio empleando tecnología de biosensores. Para esto, primeramente se establecieron las condiciones para la expresión de la enzima en E coli, a partir de un gen sintético optimizado para la expresión en este hospedero y posterior purificación, renaturalización y activación de la misma. Posteriormente se estableció un ensayo continuo para medir la actividad enzimática Fp2r empleando el sustrato fluorogénico Z-FR-AMC en presencia de cantidades crecientes de cada extracto. Tres extractos fueron seleccionados por sus bajos valores de IC50 para el tamizaje confirmatorio empleando la técnica de biosensores a SPR. La Fp2 activa se inmovilizó a cubetas de carboximetil-dextrano (CMD) y las cubetas resultantes fueron validadas mediante el uso de diversos inhibidores de proteasas específicos. Algunos componentes de estos extractos mostraron una interacción específica con la Fp2 inmovilizada, determinándose las constantes cinéticas y termodinámicas para la mejor de ellas. Referencias: [1] Rosenthal PJ, Sijwali PS, Singh A and Shenai BR. Current Pharmaceutical Design, 2002, 8, 99-110. [2] Diversidad Biológica Nacional, República de Cuba, Biodiversidad Marina. Instituto Oceanología, Nodo de Biodiversidad Marina, 1995. Agradecimientos: Esta investigación fue parcialmente financiada por el proyecto IFS F4081/1 y llevada a cabo mediante una beca interna cofinanciada CONICET/IFS.