microRNAs específicos regulan la respuesta a hipoxia en Drosophila melanogaster

ANA LAURA DE LELLA EZCURRA; PABLO WAPPNER

Chascomús

Taller; II Taller de Biología Celular y del Desarrollo; 2014

En mamíferos, la adaptación a bajos niveles de oxígeno está mediada principalmente por el factor de transcripción HIF (Hypoxia-Inducible Factor). Se trata de un heterodímero a/b, en el cual HIFb es constitutivo y HIFa es regulado negativamente por oxígeno. La vía de respuesta a hipoxia se encuentra altamente conservada en Drosophila melanogaster, siendo Similar (Sima) y Tango (Tgo) los homólogos de HIFa y HIFb respectivamente. Estudios realizados en nuestro laboratorio demostraron que la maquinaria de microRNAs (miRNAs) participa en la respuesta celular a hipoxia en Drosophila. El objetivo del presente trabajo es identificar los miRNAs específicos que regulan dicha respuesta y describir los mecanismos por los que éstos operan. En primer lugar, realizamos un screen usando líneas de moscas transgénicas que contienen el reportero de hipoxia LDH-lacZ y sobre-expresan distintos miRNAs bajo el control del sistema UAS/Gal4. La sobre-expresión de dos miRNAs, miR-190 y miR-274, indujo el reportero en condiciones de hipoxia moderada. Consistentemente, mediante PCR en tiempo real, corroboramos que al sobre-expresar miR-190 o miR-274 aumentó la expresión de un gen blanco de Sima y la pérdida de función de esos miRNAs produjo una disminución de la expresión de dicho gen. Por otro lado, se observó letalidad en estadíos larvales asociada a la sobre-expresión ubicua de miR-190 o miR-274. Asimismo, al expresar estos miRNAs en el compartimento dorsal del disco imaginal de ala, se detectó un defecto en el crecimiento de dicho compartimento, lo cual se observa como una curvatura de las alas hacia arriba. Tanto el fenotipo de letalidad como el de crecimiento son característicos de la sobre-acumulación de Sima. Estos resultados sugieren fuertemente que miR-190 y miR-274 participan en la regulación de la respuesta a hipoxia en Drosophila. Mediante las estrategias descriptas podremos mejorar nuestra comprensión de los mecanismos que regulan la respuesta a hipoxia, así como también de la regulación de la expresión génica por miRNAs.