Identificación de blancos moleculares de acción de bioactivos de Rosmarinus officinalis L. en adenocarcinoma de colon humano?

BARNI MV; CARLINI MJ; REY O; CAFFERATA EG; PURICELLI L; MORENO S

CABA

Jornada; XXVIII Jornadas Multidisciplinarias de Oncología del Inst Juan H Roffo: un siglo marcando pautas en el conocimiento.; 2012

Instituto H Roffo-Universidad de Buenos Aires

Introducción y objetivos. Previamente reportamos que el ácido carnósico inhibe la proliferación y migración celular de diferentes líneas celulares de cáncer colorrectal humano (CCR)1. Se sabe que la tirosina quinasa FAK (focal adhesión kinase), una proteína clave en la progresión tumoral2, es capaz de transmitir señales río abajo de las moléculas integrinas e interacciona con diversas proteínas del citoesqueleto para activar vías de señalización asociadas con proliferación, migración y adhesión celular. Por otro lado, FAK está sobreexpresada en tumores de colon. En este trabajo investigamos si el el ácido carnósico, es capaz de modular la activación de las proteínas FAK y paxilina (proteína adaptadora fosforilada por FAK) y la organización del citoesqueleto de las líneas de CCR, eventos claves en la progresión tumoral. Materiales y Métodos. Los cultivos celulares de CCR (Caco-2, HT-29 o LoVo), se mantuvieron no confluentes con 10% suero y se trataron con ácido carnósico durante de 2 a 4 h. Se analizó, mediante Western blot la activación (fosforilación) de FAK, y de otras  proteínas de la matriz extracelular y/o sus sustratos asociados a la progresión celular, utilizando anticuerpos específicos contra proteínas fosforiladas y no fosforiladas. Resultados. Se observó que el ácido carnósico, a concentraciones que inhiben la migración celular, inhibe la fosforilación de FAK del residuo Tyr 397 (que promueve sitios de unión para la proteína Src), y del sitio Tyr Y861 (transfosforilado por Src, que aumenta su afinidad hacia la proteína adaptadora p130Cas) en aproximadamente un 60% luego de 2 h de tratamiento. Se sabe que la unión de las integrinas a la matriz extracelular estimula la autofosforilación y la actividad de FAK, promoviendo la unión a otras proteínas del citoesqueleto como paxilina. Como era de esperar, el compuesto inhibió la fosforilación de paxilina (residuo Tyr 118) mediada por el complejo FAK-Src en un 45%, a las concentraciones y tiempos evaluados. Al mismo tiempo el compuesto inhibió  en un 60% la fosforilación de la proteína p130Cas en el sitio Tyr410. Los resultados sugieren que el ácido carnósico modularía  elementos  claves involucrados en la adhesión celular y la invasión en la matriz extracelular de las células tumorales de CCR, mediante la inhibición de la actividad de FAK y la fosforilación de la proteína p130Cas, implicadas en la proliferación celular, la migración y la organización del citoesqueleto. Conclusiones. El ácido carnósico es un potencial agente antitumoral contra CCR. El conocimiento de las vías moleculares moduladas por el ácido carnósico en células de CCR y su implicancia en el desarrollo tumoral, permitirá el desarrollo de nuevos agentes terapéuticos. Bibliografía:1Oncol Rep 2012, 27 (4):1041;  2JCB, 2012,196 (3):375. Agradecimientos: FONCYT-PICT-35401. CONICET.