Tratamiento Fotodinámico de células de linfoma cutáneo T utilizando derivados del ácido 5-aminolevúlico

DI VENOSA, G; RAMIREZ J; VALLECORSA, P; SAENZ D; BATLLE, A; CALVO G; GOLA G; CASAS A

Buenos Aires

Jornada; XXXII Jornadas de Oncología Inmunooncología: Avances diagnósticos y terapéuticos?.; 2017

iNSTITUTO ROFFO

Se evaluó la terapia fotodinámica (TFD), empleando el ácido 5 aminolevúlico (ALA) y sus derivados esterificados en las líneas de Linfoma Cutáneo de Células T (LCCT). El objetivo deseado es de encontrar un potencial pro-fotosensibilizante para tratar esta patología, la cual gracias a sus características fisioanatómicas resulta un blanco potencial de la TFD.?LÍNEAS CELULARES Y CULTIVO CELULAR. Myla y Hut78, ambas lineas de LCCT, se cultivan y mantienen en medio RPMI-1640, L-glutamina 2 mM, gentamicina 40 ug/ml y SFB 10%, a 37ºC en una atmósfera CO2 5%. ?ENSAYO DE VIABILIDAD DE MTT. La relación fototoxicidad fue determinada mediante el ensayo de MTT (3-(4,5- dimetil tiazol-2-yl)-2,5- difeniltetrazoliobromuro). Luego de los tratamientos, se agregó en cada pocillo, 0,5 mg/mL de MTT y se incubaron a 37º C por 1 h. Como resultado se obtuvieron cristales de formazán, se disolvieron en DMSO y se leyó la absorbancia obtenida a 560 nm en un lector de placas (SpectraCount Packard). ?TRATAMIENTO DE TFD. Las células se incubaron en medio sin suero conteniendo ALA o derivados y luego fueron irradiadas. A continuación, se reemplaza por medio fresco y se incubaron otras 19 h para permitir que ocurra el fotodaño, y se midió la viabilidad. Se define la dosis letal 50 (DL50) como la dosis de luz que produce el 50% de muerte celular.?TRATAMIENTO LUMÍNICO. Se usaron dos tubos fluorescentes que producen un espectro de luz entre 400 y 700 nm, con máximo en 600 nm. Las placas se ubicaron a 20 cm de la fuente lumínica. Se utilizaron potencias entre 10 y 150 mJ/cm2 y la densidad de poder fue de 0,5 mW/cm2. ?EXTRACCIÓN DE PORFIRINAS DE LAS CÉLULAS. Las células se incubaron con diferentes concentraciones de ALA o sus derivados en medio sin suero. Para extraer las porfirinas acumuladas en las células, se agregó 1 ml de HCl 5% y se dejó a 37º C media hora. Las porfirinas liberadas al medio, se cuantificaron por el agregado directo de 2 ml de HCl 5%. Estas condiciones resultaron ser óptimas para una extracción completa de porfirinas. Las mediciones se realizaron en un espectrofluorómetroShimadzu RF 510, utilizando el par excitación/emisión 406/604 nm, y empleando PpIX como estándar de referencia.La cantidades de porfirinas sintetizadas (ng de PPIX/105 cél) fue de 4 a 5 para ALA, me- y He-ALA, mientras que para 88- fue de 3.25 a 4.25, y para 89-, 91-, y 95-ALA de entre 2 a 3. Para la TFD se utilizaron concentraciones bajas o plateau para las drogas más eficientes (0.25mM) por lo que las DL50 obtenidas fueron de 0.12 para He-ALA, 0.16, 0.18, 0.24 y 0.23 para 88-, 89-, 91-, y 95-ALA respectivamente, mientras que ALA y me-ALA no generaron fotodaño.Se evaluó la TFD mediada por ALA y derivados en líneas de Linfoma Cutáneo de Células T, Myla (MF) y Hut78 (S. Sésary). La ALA-TFD mostró síntesis de porfirinas y eficiencias similares a las observadas en líneas de tumores sólidos como lo es la línea LM3 de adenocarcinoma mamario. De los derivados de ALA clásicos, el Hexil ALA demostró ser altamente más eficiente que ALA y Metil ALA. También se evaluaron cuatro nuevos derivados de ALA (88ALA, 89ALA, 91ALA y 95ALA), los que demostraron ser muy buenos pro-fotosensibilizantes, tan buenos como el Hexil ALA. Este tipo de estudios demuestra el potencial de la TFD en la patología, y el screening de nuevos pro-fotosensibilizantes en busca de la mejora de la terapia fotodinámica.