Comparacion entre ALA y derivados dipeptidos de ALA para su uso en Terapia Fotodinámica.

DI VENOSA G., RODRIGUEZ L., MAMONE L., GANDARA L., BATTAH S., MACROBERT A., BATLLE A., CASAS A.

Buenos Aires

Jornada; XXVII Jornadas Multidisciplinarias de Oncología Instituto AH Roffo; 2011

Instituto de Oncologia Angel H. Roffo

La Terapia Fotodinámica (TFD) es un tratamiento antineoplásico basado en la acumulación preferencial de un fotosensibilizante en las células tumorales.  La iluminación con una luz de longitud de onda adecuada, produce la destrucción selectiva del tejido tumoral. El uso endógeno de las porfirinas generadas a partir del ácido 5-aminolevulínico (ALA) ha ampliado el uso de la TFD. La eficacia de ALA-TFD está limitada por la naturaleza hidrofílica de la molécula. El objetivo de este trabajo fue testear dos derivados hidrofóbicos dipeptidicos de ALA: AcLeuALAMe y AcPheALAMe in vitro en dos líneas celulares, PAM212 y su derivada transfectada con el oncogén Ras, PAM212-Ras. También se estudió la síntesis de porfirinas in vivo a partir de los derivados, en un modelo de células LM2 transplantadas subcutáneamente. La viabilidad celular se determinó por medio del ensayo del MTT y se determinaron las dosis lumínicas letales 50 (LD50) como los Joules/cm2 que producen el 50% de la reducción de viabilidad. Las porfirinas sintetizadas intracelularmente a partir de ALA o sus derivados, se cuantificaron en un fluorómetro luego de su extracción con HCl 5% o con un acople de fibra óptica para medir in vivo la fluorescencia superficial del tumor.In vitro, ambas líneas alcanzaron un plateau de síntesis de porfirinas a las 3h de incubación con una concentración de 0,01 mM de los derivados, mientras que con ALA el plateau se logró con 0,5 mM. La línea celular PAM212-Ras mostró mayor síntesis de porfirinas que la línea PAM212 con cada uno de los compuestos estudiados, sin embargo empleando 0,01 mM mostró mayor resistencia a la TFD, siendo sus LD50: 0,036 J/cm2 para AcLeuALAMe en PAM212; 0,077 J/cm2 para AcLeuALAMe en PAM212; 0,041 J/cm2  para AcPheALAMe en PAM212-Ras, y 0,097para AcPheALAMe en PAM212-Ras. Esta mayor resistencia en las células trabsfectadas con el oncogén Ras ha sido previamente observada con otros fotosensibilizantes en otras líneas. Además, ambos derivados peptídicos del ALA aumentan la eficacia a la TFD, dado que mostraron mayor eficacia que ALA en la síntesis de porfirinas. In vivo, al administrar los compuestos por vía i.p. en ratones portadores de LM2, se obtiene una mayor síntesis porfirínica con AcPheALAMe, en todos los tejidos, especialmente en tumor. Los mejores resultados se obtuvieron con la administración tópica de los derivados, donde la relación de porfirinas Tumor/Piel es de 0,8 para PheALAMe, mientras que en ALA es 0,5, lo que reduciría los efectos adversos de fotosensibilización cutánea de la TFD.De los resultados, podemos concluir que los derivados dipéptidos de ALA pueden ser una muy buena opción para la TFD, siendo AcPheALAMe el más prometedor.