La enzima degradante de insulina facilita la incorporación mitocondrial de insu-

CAMBEROS MARIA DEL CARMEN; PASSICOT GISEL A.; CRESTO JUAN C.

Mendoza

Congreso; XV CONGRESO ARGENTINO DE DIABETES; 2006

Sociedad Argentina de Diabetes (SAD)

Objetivos: Nosotros demostramos que la enzima degradante de insulina (EDI) se encuentra nor-malmente en la matriz mitocondrial y este hallazgo ha sido confirmado recientemente. La mito-condria es una organela insulino-dependiente. La hormona además del transporte y regulación de substratos oxidables modifica la actividad de piruvato deshidrogenasa (PDH), acetil CoA carboxilasa y cetoácido deshidrogenasa de aminoácidos ramificados (BCKDH). Sin embargo no se ha demostrado acumulación de insulina en las mitocondrias. Nuestro objetivo fue estudiar si EDI facilita la incorporación mitocondrial de insulina. Metodos: EDI fue extraída de un homogenato de músculo de rata luego de sucesivos pasos cromatrográficos en DEAE A50, pentil-agarosa, cromatoenfoque PB94 y Sephadex G200. Mito-condrias funcionantes (hepáticas) fueron aisladas según Rickwood y cols. y se estudiaron en fase 4 de respiración.La matriz mitocondrial (MM) fue aislada luego de digerir con digitonina. Catalasa y LDH fueron utilizadas para medir la contaminación peroxisomal o citoplasmática. Las mitocon-drias fueron incubadas con 2 µU de 125I-insulina biológicamente activa a 37ºC, oxígeno 100% y la reacción detenida (2ºC con N-ethilmaleimida l mM) a los 0.5, 1, 2, 3, 5, 10 min de incubación. La insulina incorporada fue calculada sobre el control (% de incremento). Luego de su incorporación en la MM fue estudiada la degradación de la 125I-insulina por cromatografía en Sephadex G50. Resultados: La contaminación peroxisomal fue residual en MM (catalasa: 0.187±0.055 mU/mg proteina),  al igual que la citosólica (LDH: 1.24±0.23 %). La MM mostró un 27.97±3.99 % de la actividad mitocondrial de degradación de insulina. El immunoblot con un anticuerpo específico anti-EDI mostró en la MM la mayor acumulación de EDI. Con EDI, la MM incorporó a los 2 min un 50% más de insulina que el control, alcanzando y manteniendo el equilibrio hasta el fin del estudio. La insulina incorporada fue degradada en forma similar a la descripta para EDI.    Conclusiones: EDI facilita la incorporación mitocondrial de insulina.