EXPRESION DE PROTEÍNAS NO CAPSIDALES DEL VIRUS DE FIEBRE AFTOSA, Y SU USO COMO SONDAS SEROLÓGICAS EN INMUNOENSAYOS DE ALTA SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD

MALIRAT, V; PEREZ VISÑUK, M; DE CONTI, E.; MARADEI E; CADENAZZI, G; BERGMANN I.E.; PEDEMONTE, A; MADDONI, G

Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argentino de Virología; V Simposio de Virología Clínica III; Simposio de Virología Veterinaria; 2017

Sociedad Argentina de Virología

La Fiebre Aftosa (FA) es una enfermedad altamente contagiosa queconstituye uno de los principales problemas internacionales en sanidadganadera. La Argentina es reconocida por la Organización Mundial deSanidad Animal (OIE) como libre de FA, parte de su territorio convacunación. Considerando la habilidad del virus de la FA (VFA) de inducirinfección persistente en algunas especies como el bovino, inclusive enanimales vacunados, una preocupación de la comunidad internacional esque la vacunación enmascare circulación viral.A pesar de que no hayevidencia fehaciente de que esto ocurra, un requisito de la OIE para elreconocimiento/mantenimiento del estatusde libre con vacunación es lademostración,a través de muestreos serológicos,de ausencia decirculación viral. Un hecho transcendental para el aval a estereconocimiento fue el advenimiento de inmunoensayos que reconoceninfección independientemente del estado de vacunación y serotipoinvolucrado.Estosdetectan anticuerpos contra proteínas no capsidales(PNC) del VFAque participan durante el proceso de replicación y no soninducidas por vacunas inactivadas convencionales.Un desafíoimportante consiste en lograr pruebas con alta sensibilidad que permitanel reconocimiento de bajos títulos de anticuerposen animalesvacunados/infectados o en etapas tardías de persistencia y altaespecificidad que no comprometa el valor predictivo positivo,especialmente en áreas de baja/nula prevalencia. En este trabajo seevaluó el comportamiento en inmunoensayos de PNC recombinantespurificadas, con el objetivo de establecer un algoritmo diagnóstico queviabilice el desempeño requerido.Se optimizaron condiciones deexpresióntermo-inducible enE. colide las PNC recombinantes 3ABC, 3D,2C, 3A y 3B, y de su purificacióna partir detécnicas de precipitacióndiferencial con urea y electroelución. Mediante un panel de sueros dereferencia,se evaluó el desempeño de una prueba de ELISA indirecto conla poliproteína 3ABC y un Western Blot con 3 de las PNC recombinantescomo sondas serológicas, para lo cual se siguieron los cuatro pasos devalidación recomendados por la OIE. Los pasos 1 y 2 se demostraron consueros de animales infectados experimental o naturalmente ya seavacunados o no, así como con sueros provenientes de áreas libres sin ycon vacunación. Para ambas pruebasse registró un amplio rango dediscriminación entre animales infectados, inclusive aquellos con bajostítulos de anticuerpos, y no infectados con o sin vacunación, así comouna repetibilidad satisfactoria, alcanzando una sensibilidad diagnósticade casi el 100% y una especificidad del 97%, para el ELISA y cercana a100% para el Western Blot. El comportamiento obtenido posibilita elestablecimiento de un algoritmo diagnóstico que logre el desempeñorequerido, representado por una prueba deELISA tamiz, con capacidadpara analizar un amplio número de muestras en forma rápida, y unensayo confirmatorio de Western Blot.