Caracterización de secuencias genómicas virales involucradas en la síntesis y empaquetado del ARN de arenavirus

D' ANTUONO, ALEJANDRA; ARMELLA SIERRA A.; LOPEZ NORA; FARIAS ANA

CABA

Congreso; XII Congreso Argentino de Virología; 2017

SAV-AAM

REP 12CARACTERIZACIÓN DE SECUENCIAS GENÓMICAS VIRALES INVOLUCRADAS EN LA SÍNTESIS Y EMPAQUETADO DEL ARN DE ARENAVIRUSArmella Sierra A, D' Antuono A, Farias A, Lopez N Centro de Virología Animal (CEVAN) ? Instituto de Ciencia y Tecnología ?Dr. Cesar Milstein?, CONICET. El genoma de los arenavirus está constituido por dos segmentos de ARN de cadena simple, cada uno de los cuales posee dos marcos abiertos de lectura no superpuestos, separados por una región intergénica no codificante (NC), que se presume involucrada en el empaquetamiento del ARN viral en las partículas infecciosas. Además, los segmentos genómicos contienen secuencias NC en sus extremos 5? y 3, que incluyen una secuencia promotora terminal de 19 nucleótidos (P19) implicada en la unión de la polimerasa viral L y la síntesis del ARN viral. Previamente, demostramos que la región 5? NC contiene señales río abajo del Promotor P19, que son esenciales para la replicación del genoma viral. El objetivo de este trabajo fue mapear las señales intervinientes en ese proceso, y comenzar a definir los elementos requeridos para la incorporación de las nucleocapsides a las partículas virales. Para eso, utilizamos un sistema basado en la coexpresión de un minigenoma (MG), que contiene un gen reportero, junto con las cuatro proteínas virales en células eucariotas. El nivel de replicación del MG salvaje o de MG mutantes con modificaciones en la región intergénica o en 5? NC fue cuantificado mediante la determinación de la actividad del gen reportero. Mediante inmunoprecipitación de los complejos NP-ARN ensamblados en las células transfectadas, seguido de análisis por Western Blot y RT-qPCR se evaluó el impacto de mutaciones sobre el ensamblado de nucleocápsides, así como sobre la interacción de los complejos NP-ARN con la polimerasa L. Se cuantificó además el nivel de MG incorporado a partículas de tipo viral. Los resultados permitieron definir una subregión que incluye un motivo conservado en la secuencia 5? NC, proximal a P19, que sería esencial para la replicación del ARN viral.