la proteína tipo histona HupB ejerce influencia en la formación de estructuras de tipo biofilm y la virulencia de Xanthomonas citri subsp. citri a través de la regulación de la biosíntesis del flagelo.

YARYURA PM; CASTAGNARO AP; MALAMUD F; TORRES PS; VOJNOV AA; CONFORTE VP; CHAZARRETA CN; MARANO MR

Rosario

Congreso; XXIII congreso Latinoamricano de Microbiología ALAM-CAM; 2016

La cancrosis es una de las enfermedades más importantes que afectan a los cítricos causando la caída prematura de hojas y frutos. El agente causante de esta enfermedad es Xanthomonas citri subsp. citri (Xcc), especie de bacterias Gram negativas de la subdivisión γ de las proteobacterias. Este patógeno es capaz de formar estructuras de tipo biofilm que resultan fundamentales para el desarrollo de la enfermedad.Construimos una biblioteca de mutantes de Xcc (cepa 306) por inserción del transposón Tn5 en el genoma que fue luego examinada a fin de hallar aquellas afectadas en la formación de biofilm. Seleccionamos aquellas mutantes con menor capacidad de adhesión a sustrato que la cepa silvestre. Una de estas, portando la inserción de Tn5 en el gen XAC1081, se estudió en detalle. XAC1081 codifica una potencial proteína tipo histona bacteriana, homóloga a la subunidad β de la proteína HU de Escherichia coli. Se ha descripto que estas proteínas son necesarias para la organización del nucleoide bacteriano y la regulación global de la expresión génica. En este trabajo se caracteriza la influencia de la mutación por pérdida de función de XAC1081, hupB, en la formación de biofilm y la virulencia de Xcc.La movilidad tipo ?swimming? permite a las bacterias desplazarse en medio líquido y depende totalmente de la presencia del flagelo. Asimismo, el flagelo es uno de los determinantes en la formación de biofilm. Analizamos la capacidad de la mutante hupB- de realizar swimming y observamos una reducción significativa respecto de la cepa silvestre (Xcc 306). La complementación en trans de esta mutante con una copia intacta del gen XAC1081 (con su propio promotor) restauró casi completamente el fenotipo silvestre. Las imágenes obtenida por microscopía electrónica del transmisión revelaron que la mutante hupB- carece de apéndice flagelar, sugiriendo que HupB regula la transcripción de los genes flagelares. La expresión de los genes flagelares está controlada por distintos reguladores de manera jerárquica. Comparamos los niveles de expresión de algunos de los genes más relativos a la síntesis del flagelo (clase I, clase II y clase III) entre la mutante hupB- y la cepa silvestre, mediante qRT-PCR. Los resultados arrojaron que fliC, gen que codifica flagelina (proteína estructuras más importante del flagelo), se expresaba alrededor de 24 veces menos en la mutante hupB- que en la cepa silvestre. Los niveles de expresión de los genes de clase II (fliA, flgM, flhA, flhF and fleN) fueron también menores en esta mutante respecto de la cepa silvestre (entre 3 y 10 veces). Concluimos que el producto del gen hupB estaría implicado en la síntesis del flagelo, mayormente regulando la expresión de la flagelina.Finalmente, cuando comparamos los síntomas producidos en Citrus limon, independientemente del método de infección empleado, hupB- fue menos virulenta que la cepa silvestre. Confirmamos, entonces, la importancia del flagelo en la patogénesis de Xcc.