La exposición de un dominio conservado de la hemaglutinina del virus de influenza por medio de una vacuna genética genera una respuesta humoral de mayor espectro que la correspondiente subunidad proteica.

PAREDES ROJAS, YESICA; CALDEVILLA, CECILIA; MATTION, NORA; IBAÑEZ, LORENA ITATI

Rosario

Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología y XIV Congreso Argentino de Microbiología ALAM-CAM 2016,; 2016

Asociación Argentina de Microbiología

Las vacunas convencionales contra influenza equina estimulan una fuerte respuesta inmune humoral frente a la hemaglutinina viral (HA). Estos anticuerpos son específicos para cada cepa, dado la alta variabilidad del dominio globular de la HA por lo que los virus escapen fácilmente a la neutralización. Se ha reportado la existencia de epitopes en otras regiones de la HA, que no solo están altamente conservadas sino que pueden ser muy relevantes en la protección si son expuestos eficientemente al sistema inmune del huésped. El objetivo de este trabajo es estudiar distintas estrategias de exposición de un dominio conservado presente en el tallo de la HA de la cepa A/Equi/Argentina/93 (H3N8), con el fin de generar inmunógenos capaces de ampliar el espectro de reactividad de los anticuerpos generados por la vacuna convencional contra la Influenza equina.Para ello se generaron dos inmunógenos basados en una secuencia de la región conservada de la HA, deleteada en su dominio globular inmunodominante. El primero es una proteína recombinante expresada en un sistema procariota, mientras que el segundo es una vacuna a ADN que contiene la misma secuencia de nucleótidos, más un dominio de trimerización de origen heterólogo. La inmunogenicidad de ambos fue evaluada mediante diferentes protocolos de inmunización. Para la vacuna a subunidad proteica, la secuencia fue clonada en el vector pET22b, expresada en E.coli y la proteína recombinante fue purificada a partir de cuerpos de inclusión. El vector de ADN fue transfectado en células HEK 293T para analizar la expresión de la proteína. En ambos casos la expresión de las proteínas fue confirmada mediante Western blot. Ratones BALB/c fueron inmunizados con ambas vacunas, la vacunas genética y la subunidad, en forma individual o combinadas secuencialmente y los sueros fueron evaluados por ELISA, utilizando proteína recombinante (subtipo H3) o partículas virales de una cepa homóloga (subtipo H3) o heteróloga (subtipo H1).Como era esperable, en placas sensibilizadas con proteína recombinante, los títulos de anticuerpos más altos de anticuerpos correspondieron a los animales inmunizados con la subunidad, seguidos por aquellos inmunizados con combinaciones de proteína y ADN. Los títulos más bajos correspondieron a los animales inmunizados solo con ADN. Cuando los sueros se analizaron en placas cubiertas con partículas virales completas, se observó también mejor respuesta a la inmunización con proteína cuando el virus pertenecía al mismo subtipo (H3). Sin embargo la respuesta frente a virus pertenecientes a otro grupo filogenético (subtipo H1) fue más alta en el caso de los animales inmunizados con ADN. Estos resultados sugieren que una vacuna basada en este dominio de HA podría proveer protección contra otras cepas virales del mismo subtipo H3, y eventualmente contra cepas pertenecientes a otros subtipos virales y que la forma de vehiculización del antígeno podría ser una clave importante.