Rol de factores celulares y proteínas virales en la traducción de los ARN mensajeros de arenavirus

FOSCALDI SABRINA; LOPEZ NORA; D' ANTUONO, ALEJANDRA; SCOLARO, LUIS

Buenos Aires

Jornada; XXXVI Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología.; 2016

Sociedad Argentina de Virologia

Rol de factorescelulares y proteínas virales en la traducción de los ARN mensajeros de arenavirus. Foscaldi, SA (1); D?Antuono, A (1); Scolaro, L (2); Lopez, NM (1). (1) Centro de Virología Animal (CEVAN) ? Instituto de Ciencia y Tecnología ?Dr. Cesar Milstein?, CONICET. (2) Laboratorio de Virología, Departamento de Química Biológica, FCEN, UBA. El genoma de losarenavirus codifica para las 4 proteínas. Los ARN mensajeros (ARNm) precursores de las mismas contienenestructura Cap en su extremo 5?, pero carecen en elextremo 3? de la cola de poliadenilato(poli(A)), característica de la mayoría de los ARNm celulares. En su lugar,presentan una región 3? no codificante que puedepotencialmente formar una estructura secundaria de tipo horquilla. En estudiosprevios demostramos que la presencia del Cap es indispensable para la traducción de los ARNm del arenavirus Tacaribe(TCRV). El objetivo de este trabajo fue estudiar la participación tanto de proteínas celulares esenciales para latraducción dependiente de Cap, como de proteínas virales, en la traducción de los ARNm virales. Para ello, sediseñaron 2 transcriptos sintéticos, uno que imita al ARN mensajerode la Nucleoproteína (NP) de TCRV (?ARNm viral?),y otro, como control, que imita al ARN mensajero de la Beta Globina humana(ARNm celular?). En ambos transcriptos sintéticos, la región codificante correspondiente fuereemplazada por la del gen de luciferasa (FLUC). Para analizar la participación del factor celular eIF4G en latraducción de ARNm de arenavirus, monocapascelulares fueron transfectadas con un plásmidoque expresa la proteasa 2A (2APro) de poliovirus, que inactiva el factor, yluego con el ARNm viral o el ARNm celular. La eficiencia de traducción de ambos transcriptos fuedeterminada mediante la cuantificación de la actividad FLUC alas 8 hs posttransfección. Como se esperaba, las células que expresaban 2APro mostraronniveles reducidos de eIF4G, determinado mediante Western Blot. En concordancia,la traducción de ambos ARNm se vio severamenteafectada (actividad FLUC menor al 8%), tanto en célulasmurinas como humanas. Para el estudio del rol del factor eIF4E en la traducción, célulashumanas fueron depletadas del mismo mediante la transfección de ARNs pequeños de interferencia. Las células fueron luego transfectadas conel ARNm viral o el ARNm celular. Los resultados indicaron que la depleción de eIF4E resultó en una disminución mayor de los niveles de traducción del ARNm celular (50%) en relación al ARN viral (25-30%). Paraanalizar la participación de las proteínas virales en el proceso de traducción de arenavirus, células humanas, depletadas o no deeIF4E, fueron infectadas con TCRV. A las 24 hs postinfección, las célulasfueron transfectadas con los ARNm sintéticos y la actividad FLUCfue ensayada 8 hs más tarde. Los resultados nomostraron diferencias significativas, ya sea en célulasdepletadas o no de eIF4E, en los niveles de traducciónde ambos transcriptos en presencia o ausencia de las proteínas virales. En conclusión, en este trabajo se observó que: 1) la traducción de los ARNm de arenavirus dependede eIF4G, 2) que muestra una dependencia limitada de eIF4E y 3) que lapresencia de las proteínas virales no aumenta laeficiencia de traducción de los ARNm virales.