Modulación de la traducción de los ARN mensajeros del virus Tacaribe mediada por la región 3? no codificante

FOSCALDI SABRINA; D' ANTUONO, ALEJANDRA; LOPEZ NORA

Buenos Aires

Congreso; XI Congreso Argentino de Virología, II Congreso Latinoamericano de Virología.; 2015

Sociedad Argentina de Virologia-Asociacion Argentina de Microbiologia

Los ARNm del virus Tacaribe (TCRV), perteneciente a la flia. Arenaviridae, poseen estructura cap en el extremo 5?. Poseen además regiones 5? y 3? no codificantes (UTR) y, a diferencia de la mayoría de los ARNm celulares, carecen de cola de poli(A) en el extremo 3?. Dentro de la región 3? UTR, presentan una secuencia de 40 nucleótidos que podría adoptar una estructura secundaria muy estable de tipo hairpin. Utilizando transcriptos sintéticos que contienen estructura cap, codifican para el gen Firefly Luciferasa (FLUC), y que son análogos a uno de los ARNm virales (el ARNm de la Nucleoproteína -NP-), demostramos previamente que la integridad de la región 3? UTR es requerida para la traducción de los ARNm virales. En este trabajo, se analizó la contribución de la estructura y la secuencia de dicha región en este proceso. Para tal fin, se evaluó la eficiencia de traducción de transcriptos sintéticos, con deleciones, inserciones o substituciones en la región 3? UTR, luego de la transfección de células en cultivo. El reemplazo de la secuencia hairpin por una secuencia que podría plegarse para formar una estructura de menor estabilidad resultó en un aumento de la actividad FLUC de hasta 40% respecto al control; mientras que la inserción de un segundo hairpin en el extremo 3? del ARNm la redujo en un 30%. La substitución de la totalidad de la región 3? UTR por una secuencia de igual longitud, sin estructura secundaria predicha, cuadriplicó los valores de actividad FLUC y su reemplazo por una cola de poli(A) produjo valores de actividad FLUC que llegaron a 1400% respecto a los valores promedio del control. Por otra parte, se investigó también la dependencia del factor celular de iniciación eIF4G así como la contribución de la proteína viral NP. La cotransfección del ARN sintético con un plásmido que expresa la proteasa 2A de enterovirus resultó en el clivaje de eIF4G, determinado por Western blot, y en la reducción de la actividad FLUC en un 50% respecto al control. En contraste, la presencia de NP no modificó la eficiencia de traducción del ARNm salvaje. Estos resultados, junto con la observación que la ausencia del cap reduce 100 veces la eficiencia de traducción del transcripto salvaje, sugieren que: 1) la traducción de los ARNm es dependiente de cap y del factor celular eIF4G; 2) la proteína viral NP no desempeñaría un rol en la traducción; 3) la estructura hairpin es un elemento modulador de la eficiencia de traducción de los ARNm virales.