GENERACION DE VACUNAS ALTERNATIVAS CONTRA LA GRIPE UTILIZANDO VECTORES VIRALES HETEROLOGOS. ?DISPLAY? EN LA SUPERFICIE DE BACULOVIRUS DE LA PORCION EXTRA-CITOPLASMATICA DE LA PROTEINA MATRIX 2 (M2e).

MORALES J.M; MOLINARI, P; BOADO L. A; MATTION N; TABOGA, O; ALVAREZ, P

Congreso; XI Congreso Argentino de Virología y II Congreso Latinoamericano de Virología; 2015

Introducción: La falta de cobertura heterosubtípica de las vacunas en uso para el control de la influenza humana es un serio problema potencial dado el tiempo prolongado del sistema de producción actual para generar una vacuna contra una nueva cepa.  El surgimiento de una cepa de alta virulencia podría convertirse en un problema muy grave. Por esta razón, es de interés de nuestro laboratorio, la generación de una vacuna del tipo ?universal? contra la gripe. Es decir, una vacuna que genere una respuesta inmune ?cross-protectora? contra distintas cepas del virus y que, por lo tanto, no requiera de una actualización anual. Con este objetivo se eligió como antígeno el péptido extra-citoplasmático de la proteína Matrix 2 (M2e) ya que se ha demostrado, que la inmunización con este péptido genera una respuesta inmune protectora contra el virus de influenza (VI). Además, dado que este péptido se encuentra altamente conservado entre las distintas cepas de influenza A, la respuesta generada es, en la mayoría de los casos, cross-protectora. Así también, trabajos previos de nuestro laboratorio demostraron la capacidad protectora del ?display? en la superficie de baculovirus (Bv) de 1 copia de M2e como fusión a la proteína gp64 (principal glicoproteína de membrana de Bv). Objetivo: Dado que se ha demostrado que la inmunización con más de una copia del péptido M2e aumenta significativamente la respuesta obtenida, en este trabajo decidimos evaluar la capacidad inmunogénica de un péptido conteniendo 4 copias en tandem de M2e también vehiculizado en la superficie de Bv. A diferencia de lo realizado en el trabajo anterior, en este caso el péptido fue fusionado a la secuencia de anclaje en membrana de la glicoproteína G del virus de la estomatitis vesicular (VSV) y no a la gp64, ya que la fusión a esta secuencia permite el ?display? en la superficie de los viriones no solo en los polos de las partículas, como ocurre con las fusiones a gp64, sino también en los laterales de la misma. Metodología: Para generar el sistema de ?display? en la superficie de Bv, utilizamos un vector conteniendo el péptido señal de gp64 y la región de anclaje de VSV mencionada previamente. Para obtener los Bv recombinantes se utilizó el sistema ?Bac to Bac? (Invitrogen) de acuerdo a las especificaciones del fabricante. Resultados: En el presente trabajo se diseñó un oligonucleótido sintético conteniendo 4 copias de M2e y éste fue clonado en el vector detallado previamente. Se obtuvieron los bácmidos recombinantes y se transfectaron células de insecto con estos bácmidos. Se obtuvieron Bv recombinantes que expresan el péptido 4M2e. Conclusión: Se produjeron stocks purificados de estos virus recombinantes los que serán utilizados, en la etapa siguiente, para la inmunización de  ratones y evaluar, así, la capacidad protectora de esta vacuna contra el desafío con virus de influenza.