. Puesta a punto de la metodología para el estudio de la interaccion homotípica de la ARN polimerasa ARN dependiente de(3DPOL) del Virus de la Fiebre Aftosa

LOTUFO C M; GIRALDEZ N A; PALACIOS C A; WILDA M; MATTION N M

CORDOBA

Jornada; • XXXII Reunion Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virologia; 2012

Sociedad Argentina de Virologia

El objetivo del trabajo consiste en identificar la presencia de interacciones homotípicas de la polimerasa viral (proteina 3Dpol) del Virus de la Fiebre Aftosa (VFA) mediante el ensayos de coinmunoprecipitación. Este trabajo se inserta dentro del proyecto de investigación del grupo orientado a entender las bases moleculares de la replicación de virus pertenecientes a la familia Picornaviridae. La familia Picornaviridae comprende un grupo importante de patógenos que afectan a humanos y animales, siendo los más estudiados de este grupo el virus de la poliomielitis (PV), rhinovirus (HRV) y el virus de fiebre aftosa (VFA). Los miembros de esta familia son virus pequeños, no envueltos y de estructura icosaédrica. Su genoma consiste en una única cadena de ARN de polaridad positiva que codifica para un solo marco abierto de lectura (ORF). Un componente esencial de la maquinaria de replicación es la ARN polimerasa ARN -dependiente (RpRd), denominada 3Dpol. Las RpRd de los picornavirus presentan una arquitectura espacial similar y la topología se caracteriza por la presencia de tres dominios conservados: finger, palm y thumb. Al igual que la RpRd de otros picornavirus, el dominio palm de la 3Dpol del VFA está compuesto de los cinco motivos (A, B, C, D y E) involucrados directamente en la actividad enzimática. Este dominio se encuentra encerrado y protegido por los dominios finger y thumb como consecuencia de extensivas interacciones entre estos dos últimos. Existen evidencias que indican que la actividad de las RpRd de PV está asociada a la formación de oligómeros de dicha proteína. Más aún, se identificaron dos interfases de interacción (I y II) 3D-3D que contactan el dominio thumb de una molécula y el dominio palm de otra adyacente. Además, resultados experimentales indican que la proteína 3D del VFA también sería capaz de formar oligómeros de dicha proteína en presencia de UTP, templado (poliA) y primer (oligo dT). A pesar de ello, los dominios y motivos involucrados no se conocen así como tampoco si la oligomerización de esta proteína es determinante para la replicación del VFA.