Evaluación de una vacuna contra influenza humana usando la lumazima sintetasa de Brucella abortus (BLS) como carrier del dominio extracitoplasmático de la proteína Matrix 2 (M2e)

ALVAREZ, PAULA; ZYLBERMAN, VANESA; GHERSI, G.; BOADO, LORENA; GOLDBAUM, FERNANDO; MATTION, NORA

Buenos Aires

Congreso; X Congreso Argentino de Virologia; 2011

Asociacion Argentina de Microbiologia

Introducción. La gripe es una de las enfermedades virales respiratorias agudas con mayor impacto sobre la población humana. Esta enfermedad es causada por el virus influenza y la vacunación es actualmente el método más efectivo para prevenir la infección así como para reducir la severidad de las complicaciones en los individuos infectados. Sin embargo, la falta de cobertura heterosubtípica de las vacunas en uso es un serio problema potencial para la sanidad humana. La idea de desarrollar una vacuna de amplia cobertura contra influenza ha sido una meta buscada por más de 50 años. Hace años se comprobó que era posible obtener protección heterosubtípica y se identificó a la nucleoproteína (NP) y a la proteína de matrix 2 (M2) como los blancos principales de la inmunidad cruzada. Específicamente el dominio extracitoplasmatico de M2 (M2e) genera una respuesta inmune protectora frente al desafío con dosis letales del virus. Además, como este péptido se encuentra altamente conservado entre las diferentes cepas, la respuesta que genera es, en la mayoría de los casos, de protección cruzada. Con el fin de lograr una vacuna de amplio espectro, en trabajos previos fusionamos el péptido M2e a la lumazina sintetasa de Brucella abortus (BLS) y demostramos la capacidad inmunogénica de esta quimera (BLS-M2e). Este desarrollo implica el uso de un potente inmunoestimulante decamérico (BLS) como portador del antígeno viral, con lo cual se espera que aumente significativamente la respuesta contra el péptido M2e y por lo tanto su capacidad de protección cruzada. Objetivos. Trabajos publicados en relación a la capacidad protectora de M2e indican que la inmunización con más de una copia del péptido aumenta significativamente la respuesta protectiva contra influenza. Por lo tanto en el presente trabajo se generó una nueva quimera conteniendo 4 copias de M2e y se evaluó la respuesta inmune obtenida en relación a la quimera conteniendo 1 copia. Metodología.  El gen conteniendo 4 copias de M2e fue clonado en el vector pET11a en fase con el gen BLS. Se transformaron cultivos de E. coli y la proteína fue purificada a homogeneidad. Las moléculas decaméricas se forman espontáneamente. Las proteínas de fusión fueron formuladas con distintos adjuvantes y se inmunizaron ratones Balb/c de 60 días por vía subcutánea. Se colectaron los sueros y se determinó el título de anticuerpos anti M2e por ELISA.Resultados. Se generó la quimera BLS-4M2e y las proteínas quiméricas fueron expresadas y purificadas. Los ratones inmunizados con las vacunas experimentales desarrollaron títulos significativos de anticuerpos anti-M2e. La presencia de un mayor número de copias de M2e en la quimera (BLS-4M2e) potencia significativamente la respuesta. La capacidad protectiva de estos desarrollos fue evaluada en ensayos de desafío en ratones con el virus de influenza. Conclusiones. La secuencia del péptido M2e de influenza ha sido altamente conservada en las cepas humanas circulantes en los últimos 100 años. Por lo tanto, la vacuna evaluada en el presente trabajo puede ser propuesta como candidato potencial ante la emergencia de una nueva pandemia de influenza.