Caracterización de regiones de la proteína n de arenavirus implicadas en su autoasociación

SABRINA FOSCALDI; ALEJANDRA DANTUONO; MARIA EUGENIA LOUREIRO; JESICA M. LEVINGSTON MACLEOD; CRISTINA MARINO BUSLJE; NORA LOPEZ

Buenos Aires

Congreso; X Congreso Argentino de Virología; 2011

Sociedad Argentina de Virologia

P229 CARACTERIZACIÓN DE REGIONES DE LA PROTEÍNA N DE ARENAVIRUS IMPLICADAS EN SU AUTOASOCIACIÓN S Foscaldi1, A D’Antuono1, E Loureiro1, J Levingston1, C Mariño-Buslje2, N López1 1 CEVAN -CONICET, Argentina. 2 FI Leloir -CONICET, Argentina.   Introducción. Los Arenavirus, tales como el virus Tacaribe (TCRV), son virus envueltos cuyo genoma está constituido por dos segmentos de ARN de cadena simple que codifican para la nucleoproteína (N), el precursor de las glicoproteínas de envoltura, una ARN polimerasa ARN dependiente (L) y para la proteína matriz, Z. La proteína N es el elemento estructural principal de las nucleocápsides virales, en ellas, N se encuentra asociada a los ARNs genómicos y antigenómicos. Las nucleocápsides son usadas como templado para la transcripción y replicación del genoma viral por parte de la polimerasa L. Así, las proteínas L y N son suficientes para dirigir la transcripción y replicación de ARN análogos a los ARN virales. Previamente, hemos demostrado que N es capaz de autoasociarse, y que la autoasociación de N requiere de la integridad de un motivo coiled coil situado en su región amino-terminal (aminoácidos 92 a 119). Demostramos también que la mutación de aminoácidos que ocupan posiciones clave dentro de ese motivo anula la capacidad de N de sostener la replicación del genoma viral (J Virol.85: 2012–2023, 2011).  El objetivo de este trabajo fue profundizar el conocimiento de los determinantes moleculares de la autoasociacion de N. Resultados. La estructura trimérica de la proteína N del arenavirus del Viejo Mundo Lassa (LASV), recientemente determinada, fue utilizada como templado para determinar la disposición espacial de los aminoácidos de la proteina N de TCRV e identificar regiones presumiblemente involucradas en las interacciones intermoleculares N-N. El modelado molecular fue realizado con el servidor Swiss-model y validado empleando los programas Procheck y Verify3d. A partir del modelo se determinaron dos regiones de contacto N-N que permitirían la trimerización de esta proteína, una de ellas delimitada entre los residuos 195 y 259 y la segunda comprendida entre los aminoácidos 281 y 287. Finalmente, se determinó que los residuos 105 y 108, localizados dentro del motivo coiled coil, contactarían con residuos ubicados en la segunda región de contacto N-N. Residuos clave dentro de estas interfases de contacto putativas fueron reemplazados por el aminoácido no polar Alanina. La habilidad de las mutantes puntuales de N de autoasociarse fue evaluada mediante ensayos de coinmunoprecipitación. Su capacidad para promover la síntesis del ARN viral fue determinada utilizando un sistema de genética reversa. Conclusiones. Se lograron definir interfases de contacto N-N y residuos cruciales para mantener la interacción N-N y su funcionalidad durante la replicación del genoma viral.