Producción del anticuerpo 14D9 en un biorreactor mixto utilizando líneas recombinantes de suspensiones celulares de Nicotiana tabacum

MARCONI, P; LÓPEZ, J; JUNCO, M; NELSON, G; ALVAREZ, MA

Buenos Aires

Simposio; VIII Simposio Nacional de Biotecnología Redbio Argentina 2011; 2011

RedBio Argentina

El anticuerpo murino 14D9 (tipo IgG1), de alta eficiencia, cataliza la hidrólisis estereoselectiva de enol éteres aquirales siendo de utilidad para la síntesis orgánica. En trabajos previos hemos informado su expresión en diferentes cultivos de Nicotiana tabacum (López et al, 2010, Petruccelli et al. 2006, Martínez et al. 2005). En el presente trabajo se realizaron estudios acerca del comportamiento del cultivo en un bioreactor INFORS HT, modelo Minifors con sensor de oxígeno y pH. El proceso fue controlado y monitoreado on line a través del sistema Iris vs. 5.2. Para realizar estos estudios se desarrollaron procesos utilizando las líneas de N. tabacum wild type (WT, línea materna no transformada) y la línea 14D9 AbKDEL (porta el transgen de 14D9 y la señal KDEL de retención en ER). Los parámetros del proceso fueron: velocidad de agitación (100 rpm) dada por un impeller marino, aireación (1 vvm) y temperatura (24±2ºC). Se registró la variación de pH a lo largo del cultivo (inicial 5.7). En todos los casos el medio de cultivo utilizado fue el mismo descripto para las suspensiones celulares (1100 mL contenido en un vaso de 2500 mL, López y col., 2010). Se analizó la influencia de diferentes tamaños de inóculo: 5 a 10 % P:V. El KLa (98 h-1) fue estimado por el método estático de desgasificación, mientras que el consumo de oxígeno (Q=3.7 g.L-1.h-1) por el método dinámico en un cultivo de células WT. Los resultados obtenidos nos permitieron estimar los parámetros correspondientes a la cinética de crecimiento del cultivo de ambas líneas y de producción del anticuerpo.