Optimización de un ELISA para medir niveles de interferón-γ como resultado de la inmunización con diferentes serotipos del virus de fiebre aftosa en bovinos.

BUCAFUSCO, DANILO; DI GIACOMO, SEBASTIÁN; PEGA, JUAN; MALACARI, DARÍO; SCHAMMAS, JUAN MANUEL; SMITSAART, ELIANA; LEVY, SUSANA; ALEJANDRA CAPOZZO; PÉREZ FILGUEIRA, D MARIANO

Congreso; X Congreso Argentino de Virología; 2011

AAM. Sociedad Argentina de Virología

ntroduccion: La amplia diversidad antigénica del Virus de Fiebre Aftosa (VFA) y la escasa la protección cruzada entre variantes, obliga a un constante monitoreo y eventualmente actualización de las cepas vacunales en relación a las que circulan regionalmente. si bien existe información sobre la reactividad cruzada de anticuerpos entre tipos y subtipos del VFA, poco se sabe sobre la capacidad particular de cada serotipo de activar respuestas celulares en animales vacunados con virus homólogos o heterólogos. objetivo: evaluar la producción de IFN-γ como resultado de la inmunización de bovinos con diferentes serotipos de VFA. Metodología: Para evaluar este tipo de respuestas se adaptamos y estandarizamos para medición de inmunidad celular contra el VFA, un ELISA comercial Bovigam® (Prionics) diseñado para detectar IFN-γ bovino inducido por antígenos de Mycobacterium tuberculosis. Para la puesta a punto se utilizaron 283 bovinos vacunados y 106 bovinos näive. utilizando sangre de estos animales se probaron diferentes concentraciones VFA inactivado y purificado de las cepas o1C, A24, A2001, A87 y C3i. Comprobamos que la incubación de la sangre entera (750 μl) durante 16-24h con 10µg/ml de virus purificado y como controles el mitógeno Pokeweed (PWM) (10 μg/ml) o PBs (+ y -, respectivamente), daba los resultados más consistentes y repetibles. se traspasan luego 50 μl de sobrenadante (plasma) a las placas de detección del kit. el resto del ensayo se realiza siguiendo las instrucciones del fabricante y se incluye una curva estándar con concentraciones conocidas de IFN-γ bovino recombinante (Abd serotec). Finalmente, el ensayo fue utilizado en pruebas vacunales de potencia y de vaccine matching para los serotipos o y A. resultados: Se fijaron los límites de detección de la técnica desde 0,195 a 25 ng/ml de IFN-γ. La estimulación con PWM actúa como control de la viabilidad y funcionalidad de las células, estableciendo como muestras válidas las que producen > 3,2 ng/ml de IFN-γ con PWM y