“Estudio de los determinantes moleculares del ensamblado de arenavirus”.

LOPEZ, NORA

Buenos Aires

Congreso; X Congreso Argentino de Virologia; 2011

SAV-AAM

El virus Tacaribe (TCRV), un miembro de la familia Arenaviridae, está estrechamente relacionado con los arenavirus sudamericanos productores de fiebres hemorrágicas y en particular, con el virus Junín, agente causal de la Fiebre Hemorrágica Argentina. Sin embargo, el TCRV no es patógeno, característica que contribuye a que sea un interesante modelo para el estudio de los arenavirus patógenos. Tal como los demás miembros de esta familia, TCRV es un virus envuelto, que se genera por brotación en la membrana plasmática de las células infectadas. Su genoma está constituido por dos segmentos de ARN de cadena simple (S y L), cada uno de los cuales usa una estrategia bisentido para codificar dos proteínas. El segmento genómico S codifica para la nucleoproteína (N) y para el precursor (GPC) de las glicoproteínas de envoltura. El segmento L codifica para una ARN polimerasa ARN dependiente llamada proteína L y para la proteína Z, propulsora de la morfogénesis viral. Ambos segmentos de ARN se asocian estrechamente a la proteína N formando las nucleocápsides, que funcionan como templado para la transcripción y replicación del genoma viral por parte de la polimerasa L. Con el propósito de investigar las bases moleculares del ensamblado y brotación de los arenavirus, nuestro grupo desarrolló un sistema de genética reversa que permite la replicación de un minigenoma y su ensamblado dentro de partículas de tipo viral (VLPs) quiméricas infectivas. Utilizando ese sistema, pudimos demostrar que la interacción entre las proteínas Z y N es necesaria para la incorporación tanto de las nucleocápsides como de las glicoproteínas virales a las VLPs. Esos resultados evidenciaron que la proteína N no sólo participa en la replicación del genoma viral sino que también desempeña un rol importante durante el ensamblado de las partículas de arenavirus. Mediante coinmunoprecipitación, ensayos de formación de VLPs y microscopia confocal, pudimos definir dos dominios funcionales bien diferenciados en la proteína N de TCRV: un dominio carboxi-terminal,  implicado en la interacción con Z, y otro amino-terminal, involucrado en la homo-oligomerización de N. Encontramos también que la integridad de un motivo Zinc finger (CX2HX23CX4C) carboxi-terminal, conservado en todos los arenavirus, es crucial para la interacción N-Z y para la incorporación de N a VLPs. Demostramos además, que la auto-asociación de N requiere de la integridad de un motivo coiled coil situado en la región amino-terminal, y que la mutación de aminoácidos que ocupan posiciones clave dentro de ese motivo anula la capacidad de N de sostener la replicación del genoma viral. Por otra parte, el sistema de genética reversa nos ha permitido abordar el estudio de las señales presentes en el genoma viral que participan en su replicación y ensamblado en partículas infecciosas. El conocimiento de las bases moleculares de esos procesos podría contribuir a la identificación de nuevos blancos para el desarrollo de compuestos antivirales contra este grupo de virus.