Expresión del inmunógeno E2 del virus de la Diarrea Viral Bovina en células vegetales.

NELSON, G.; MARCONI, P.; LA TORRE, J.; ALVAREZ, M. A

Buenos Aires

Congreso; Feria Congreso Latinoamericano de Biotecnología, IV Congreso Argentino de Biotecnología, 2010.; 2010

BioLatina

Resumen: la diarrea viral bovina es una enfermedad que provoca pérdidas económicas considerables cuyo agente causal es un virus (BVDV), donde la glicoproteína E2 es el mayor inmunógeno capaz de generar una respuesta imnune. A partir de ésta proteina se busca el desarrollo de nuevas vacunas y sistemas de producción más eficientes. El presente desarrollo busca establecer una plataforma de producción vegetal que exprese la E2 para ser utilizada como inmunógeno vacunal. Para ello, a partir de la secuencia truncada de la E2 se construyeron variantes de vectores binarios. Estas construcciones se utilizaron en el sistema de Agrobatcerium tumefasciens para transformar plantas en forma transiente y discos de hojas en forma estable. MyM: se utilizó el sistema Gateway para realizar las construcciones utilizando GFP como gen marcador. La E2 truncada quedó bajo el control del promotor CaMV35S y T35S terminador. Además se incluyó la señal de direccionamiento a ER, s2s en ´5, y en ´3 las señales His-tag y las variantes con y sin señal KDEL. Los procesos de transformación se realizaron siguiendo la metodología clásica del laboratorio. Resultados: las construcciones fueron verificadas por PCR, mapeo de restricción y secuenciación. Las plantas transgénicas mostraron señal GFP y se analizó por ELISA y Western blot la expresión de la ∆E2 en las diferentes líneas transientes y estables obtenidas. Conclusiones: se obtuvieron expresiones transientes y varias líneas estables de E2 en plantas y cultivos de callos y in vitro. Los rendimientos fueron variables según las construcciones y los sistemas en estudio.