Comportamiento interfacial de benzodiacepinas aciladas como potenciales ligandos para la purificación del R-GABAA.

ANAHI V. TURINA; GISELA J. QUINTEROS; ELIZABETH L. MOYANO; MARÍA A. PERILLO

Los Cocos, Córdoba

Workshop; XXXVIII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2009

Sociedad Argentina de Biofísica

El análisis de la modulación de receptor GABAA (R-GABAA) inducida por las propiedades mecanoelásticas de su entorno molecular en biomembranas  requiere contar con receptor purificado para ser reconstituido en membranas modelo. La purificación por afinidad, sería posiblepor medio de un sistema consistente en superficies funcionalizadas por recubrimiento con el ligando específico. En este trabajo se muestra el comportamiento en la interfase agua-aire de una benzodiacepina (BZD) acilada en la posición N1 con cadenas hidrocarbonadas de diferente longitud (OC y DDC, 8 y 12 C respectivamente) sintetizadas en nuestro grupo, así como la capacidad de estas moléculas para desplazar una BZD de su sitio de unión en el R-GABAA.Se observó que ambos derivados, tanto puros como en mezclas con dpPC a varias fracciones molares (X), se estabilizaron en la interfase agua-aire, siendo las presiones de colapso (P) y las áreas moleculares mínimas (AMm) de los compuestos puros, P,OC=18.8 mN/m,  AMmOC=49 Å2/molec y  P,DDC=10.3 mN/m, AMmDDC=51 Å2/molec). Las mezclas mostraron miscibilidad en XOC/DDC= 0-0.1 y su estabilidad disminuyó en función de XOC/DDC. Por encima de X= 0.1, la presencia de transiciones bidimensionales a presiones diferentes a las P de los compuestos puros sugirió la coexistencia de fases mezcla de diferente composición en la misma monocapa. La variación del área vs XOC/DDC  mostró una desviación positiva de la idealidad sugiriendo interacciones repulsivas o impedimentos estéricos para el empaquetamiento. Por otra parte, fueron capaces de incorporarse a interfases lipídicas empaquetadas a diferentes presiones laterales, siendo el Pcut off AC= 13 mN/m y Pcut off DDC= 35mN/m..Finalmente, estudios de desplazamiento de radioligando mostraron que ambas moléculas fueron capaces de desplazar al ligando marcado de su sitio de unión en el R-GABAA, siendo OC más potente que DDC (KiOC=176 nM y KiDDC=0.9microM). Se evaluó la ocurrencia de fenómenos inespecíficos y estructurales que podrían afectar la interacción del ligando con el receptor.