Efecto de un flavonoide prenilado de dalea elegans sobre el estrés oxidativo y el transporte activo de biofilms de Candida albicans.

MARIANA A. PERALTA, MARÍA A. DA SILVA, MARÍA G. ORTEGA, JOSÉ L. CABRERA, CRISTINA PÉREZ, MARÍA G. PARAJE.

Rosario, Santa Fe

Simposio; XI Simposio Argentino XIV Simposio Latinoamericano de Farmacobotánica; 2013

Soc. Arg. de Farmacobotánica

La resistencia múltiple a drogas (MDR) en cepas fúngicas, es efectuada por la sobreexpresión de transportadores de membrana. En estudios previos realizados sobre una cepa de C. albicans (CaR) resistente a fluconazol por sobreexpresión de transportadores, demostramos que el flavonoide 2?,4?-dihidroxi-5?-(1???,1???-dimetilalil)-8-prenilpinocembrina (8PP) aislado de raíces de Dalea elegans Gillies ex Hook et Arn (Fabáceas), inhibió las bombas de eflujo y combinado con fluconazol, revirtió la resistencia en esta cepa. Otra forma de resistencia a antifúngicos, es la formación de biofilms, donde las células se adhieren irreversiblemente a una superficie y se recubren de una sustancia exopolisacárida. En este trabajo el objetivo fue estudiar la actividad de 8PP sobre el estrés oxidativo y los transportadores de membrana (MDR) en las células de C. albicans agrupadas en biofilms. La formación del biofilms se realizó en placa de 96-pocillos y se cuantificó por tinción con cristal violeta, definiendo la Unidad de Biomasa del Biofilms (UBB) como 1UBB=0,1Abs595nm. Se utilizó una cepa sensible (CaS) y otra resistente a fluconazol (CaR) por transportadores de eflujo. Para evaluar el estrés oxidativo en biofilms, se midió el anión superóxido mediante la reacción colorimétrica con NBT y la capacidad antioxidante total del biofilms por la metodología FRAP (ferric reduction antioxidant power). Para valorar el funcionamiento de los transportadores en células del biofilms se utilizó citometría de flujo. Se midió la fluorescencia captada por las células (M1) durante la incubación con Rodamina 6G (R6G), se realizó una segunda incubación sin R6G para que actúen los transportadores, y se midió la fluorescencia remanente en las células (M2). La diferencia entre M1 y M2 representa el eflujo de R6G. Se observó que la presencia de 8PP (50 µM) inhibió las unidades de biomasa del biofilms (UBB) incrementando las especies reactivas del oxígeno y la capacidad antioxidante total del sistema con respecto al control. La reducción del biofilms fue mayor en CaS que en CaR (80% y 34% de inhibición respectivamente). En cuanto al funcionamiento de los transportadores en células del biofilms, los resultados muestran que en la cepa CaS, el eflujo de R6G en células del biofilms fue mayor que en el estado planctónico (97,92% y 28,6% de eflujo de R6G respectivamente). Esto indica un aumento de la actividad de transporte durante la formación del biofilms de CaS. El eflujo en la cepa CaR, fue similar comparando células del biofilms y en estado planctónico (90% y 95% de eflujo de R6G, respectivamente). En conclusión, 8PP inhibe el biofilms de C. albicans, tanto sensible como resistente a fluconazol, incrementando el estrés oxidativo. La inhibición que este flavonoide prenilado ejerce sobre los transportadores de eflujo podría potenciar su acción de reducción del biofilms. Palabras clave: Dalea elegans, flavonoide prenilado, biofilms