Actividad antifúngica in vitro de extractos de una especie vegetal fototóxica sobre biofilms de Candida no albicans.

JULIANA, MARIONI, JULIO E. ARCE MIRANDA, LAURA R. COMINI, JOSÉ L. CABRERA, MARÍA G. PARAJE, SUSANA C. NÚÑEZ MONTOYA.

Córdoba

Congreso; II Reunión de Fotobiólogos Moleculares; 2013

Fotobiólogos Moleculares Argentinos

Introducción: Heterophyllaea pustulata Hook. f. (Rubiaceae) es una planta fototóxica que habita en la región andina del NO argentino y de Bolivia, donde se conoce popularmente como ?cegadera?1, 2. Previamente, hemos demostrado que sus extractos ricos en antraquinonas (AQs) poseen propiedades antibacterianas y antifúngicas in vitro sobre la forma planctónica de distintas cepas, con baja toxicidad aguda in vivo3. Nuestro grupo ha iniciado el estudio del efecto antifúngico in vitro de extractos de H. pustulata y de sus principales metabolitos sobre distintas especies de Candida, debido a que son causantes de infecciones intrahospitalarias por su capacidad para formar biofilms. El objetivo de este trabajo fue evaluar la actividad de extractos de diferente polaridad de H. pustulata sobre biofilms formados por Candida no albicans, estudiando si el efecto podría ser incrementado por la luz y cuantificando la generación de especies reactivas del oxígeno (ERO) y del nitrógeno (ERN). Materiales y Métodos: Se obtuvieron 4 extractos a partir de sus partes aéreas: hexánico (Ext-H), bencénico (Ext-B), acetato de etilo (Ext-AE) y etanólico (Ext-E). La cuantificación del biofilm se realizó sobre biofilms maduros (48 h) por la técnica de O?Tool & Kolter4, usando una cepa clínica de C. tropicalis. La sensibilidad a los extractos se determinó según las normas del Clinical and Laboratory Standards Institute5, a 3 concentraciones (0.2, 0.1 and 0.05 mg/ml) por triplicado. El ensayo se efectuó simultáneamente bajo dos condiciones: oscuridad y radiación; para ello se utilizó una lámpara actínica de 20W Phillips (380?480 nm, 0.65 mW/cm2) con un máximo a 420 nm, ubicada en una caja oscura a 20 cm por encima de las muestras. A partir de los sobrenadantes se determinó la producción de anión superóxido (O2-.) mediante la reacción de reducción de Nitroblue Tetrazolium6, la generación de óxido nítrico (ON) a través de la Técnica de Griess7, y la capacidad antioxidante total del sistema por medio del ensayo FRAP (Ferrous Reduction Antioxidant Potency)8. Resultados: En oscuridad, el Ext-B fue el único que resultó activo a la mayor concentración probada, mientras que bajo radiación todos los extractos tuvieron capacidad para disminuir el biofilm, potenciándose el efecto del Ext-B (reducción del 28,1±4.2 % a 0,2 mg/ml) respecto a oscuridad. Además, cuando el sistema fue irradiado se observó incremento en la generación de O2-, sin modificar significativamente la producción de ON. La capacidad antioxidante total del sistema también aumentó respecto a oscuridad a la mayor concentración probada para el Ext-B. Conclusiones: La capacidad de inhibición del crecimiento de los extractos de H. pustulata sobre los biofilms de C. no albicans clínica, se correlacionaría con el efecto de la radiación que estimula la producción de una de las ERO más importante: el anión superóxido. Estos resultados motivan a evaluar la composición cuali-cuantitativa de los extractos a fin de explicar el efecto observado por los extractos. Por otra parte, dado que los biofilms de Candida presentan marcada resistencia a antifúngicos de uso clínico, la obtención de compuestos naturales activos frente a esta forma de crecimiento, ameritaría la continuidad de nuestras investigaciones, evaluando el efecto de las AQs aisladas y purificadas del extracto bencénico de H. pustulata.