Efecto de antibióticos sobre el biofilms, su relación con el estrés oxidativo y la liberación de toxina shiga.

ANGEL VILLEGAS, N; BECERRA, MC; POLIFRONI, R; PARMA, A; ETCHEVERRIA, A; PADOLA, N; ALBESA, I; PARAJE, MG.

Cba

Congreso; XII Congreso Argentino de la Sociedad Argentina de Infectologia.; 2012

Soc. Arg de infectologia

E. coli O157:H7 (STEC) es un patógeno transmitido por alimentos que se asocia a brotes de diarrea, colitis hemorrágica y síndrome urémico hemolítico (SUH). Este serotipo es el más frecuente asociado al SUH post diarrea, donde se ha demostrado exposición verotoxina o toxina Shiga (tSh) en el 85% de los casos, sin embargo otros serogrupos también pueden producir esta toxina. En Argentina, el SUH post-entérico asociado a esta bacteria es endémico y se producen aproximadamente de 400 casos nuevos por año, con el registro más alto de SUH de todo el mundo. La patogenicidad está asociada con varios factores de virulencia, entre los que se incluyen la producción de la tSh ( 1 y 2). Las cepas más virulentas de STEC además poseen otros como enterohemolisina (ehxA) e intimina (eae). Un nuevo factor de virulencia podría ser la capacidad que poseen las STEC para formar biofilms, existiendo escasos reportes en STEC. El biofilms, por su naturaleza estructural y las características de las células sésiles, tienen una resistencia intrínseca a agentes antimicrobianos. Varias razones han sido investigadas, aunque el mecanismo preciso de cómo se altera esta sensibilidad no está esclarecido. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de antibióticos, uno bacteriostático (Rifaximina) y otro bactericida (Ciprofloxacina) sobre el biofilms, el estrés oxidativo y la liberación de tSh. Se utilizaron dos cepas clínicas de E. coli (O157:H7 y O:111) y una de referencia (EDL 933), asociadas a casos de SUH de Córdoba. Se determinó la Concentración Inhibitoria Mínima (CIM) y se trabajó a dos concentraciones subCIM y dos supraCIM. La capacidad de formar biofilms de las cepas de E.coli se determinó mediante la adhesión a placas de poliestireno de 96 wells y su posterior coloración con cristal violeta determinando la densidad óptica a 595 nm. El estrés celular se estudió determinando las Especies Reactivas del Oxígeno (ERO) utilizando Azul de Nitro Tetrazolio (540 nm). La generación del Nitrógeno (ERN) mediante Griess. El sistema antioxidante de defensa fue evaluado por la determinación de las enzimas superóxido dismutasa (SOD) y catalasa (CAT) y la capacidad antioxidante total se estudió por FRAP. La liberación de toxina fue determinada en cultivos por citotoxicidad en células Vero, considerado ?gold estándar? para la determinación de tSh. Se observó estrés oxidativo con los dos antibióticos en los distintos serotipos estudiados, sin embargo sólo en Ciprofloxacina se puedo lograr la erradicación del biofilms. Además, cuando disminuía la formación de biofilms, aumentaba tanto el estrés oxidativo, con disminución del sistema antioxidante y la capacidad antioxidante total. El efecto citotóxico en Células Vero aumentó notablemente en condiciones de alto estrés, no existiendo reportes hasta el momento de este efecto ni de la liberación de tSh desde las células sésiles del biofilms. Conclusiones Los antibióticos mostraron diferencias tanto en la erradicación del biofilms como en el desbalance oxidativo producido, siendo más marcado este desbalance con el antibiótico bactericida. Estos resultados sugieren que desde el biofilms existe liberación de tSh lo cual podría estar relacionado al estrés que sufren las células sésiles que forman parte del biofilms.