BIOFILMS, ESTRÉS CELULAR Y EFECTO CITOTÓXICO EN ESCHERICHIA COLI PRODUCTORA DE TOXINA SHIGA

ANGEL VILLEGAS, NATALIA; ARROYO GUILLERMO; PARMA, ALBERTO; ETCHEVERRÍA, ANALÍA; PADOLA, NORA; ALBESA, INÉS; BECERRA, MARÍA CECILIA; PARAJE, MARÍA GABRIELA.

Jornada; II Jornadas de Jóvenes Investigadores de la UNC. Construcción y difusión de conocimientos desde la Universidad Pública; 2012

Título del Trabajo: BIOFILMS, ESTRÉS CELULAR Y EFECTO CITOTÓXICO EN ESCHERICHIA COLI PRODUCTORA DE TOXINA SHIGA Eje temático: Microbiología Autores: ANGEL VILLEGAS, natalia; ARROYO guillermo; PARMA, alberto; ETCHEVERRÍA, analía; PADOLA, nora; ALBESA, inés; Becerra, maría cecilia; PARAJE, maría gabriela. Datos del expositor: D.N.I.: 30.507.693 Teléfono laboral: 0351-5353865 interno: 53352 Teléfono particular: 0351-156748174 e-mail: nvillegas@fcq.unc.edu.ar Institución: Departamento de Farmacia- Facultad de Ciencias Químicas ? Universidad Nacional de Córdoba. Palabras clave: Escherichia coli, biofilms, estrés oxidativo, toxina Shiga. Resumen: Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC) se asocia a brotes de diarrea, colitis hemorrágica y Síndrome Urémico Hemolítico (SUH)1. La patogenicidad de esta bacteria está asociada con varios factores de virulencia, entre los que se incluyen la producción de Toxina Shiga (Stx)2. Un factor de virulencia adicional sería la capacidad que poseen estas cepas de formar biofilms, existiendo escasos reportes en STEC. El objetivo de este trabajo es determinar la relación entre la capacidad que posee la bacteria para formar biofilms en distintas condiciones de cultivo; el estrés celular, y la liberación de toxina Shiga. Se utilizaron dos cepas clínicas (1: serotipo O157:H7, 2: serotipo O111) y una de referencia (E.coli EDL 933). Se determinó la capacidad de formar biofilms en caldo tripteína soya (CTS) y en tioglicolato, con y sin el agregado de glucosa (0,5%), respectivamente. Se utilizó una coloración con Cristal Violeta (espectrofotometría a 595 nm) para cuantificar la formación de biofilms3. El estrés celular se estudió determinando las Especies Reactivas del Oxígeno (ERO) utilizando Azul de Nitro Tetrazolio (540 nm) y las Especies Reactivas del Nitrógeno (ERN) mediante la técnica de Griess4. El sistema antioxidante de defensa fue evaluado por la determinación de las enzimas superóxido dismutasa (SOD) y catalasa (CAT) y la capacidad antioxidante total se estudió por FRAP (ferrous reduction antioxidant potency)5. La liberación de toxina fue determinada en sobrenadantes de cultivos por ensayo de citotoxicidad en células Vero, considerado como la técnica ?gold estándar?6. Se observó que cuando aumentaba la formación de biofilms, disminuía tanto el estrés oxidativo y nitrosativo como los niveles de defensa enzimáticos, la capacidad antioxidante total y el efecto citotóxico. Estos resultados sugieren que desde el biofilms existe liberación de toxina Shiga lo cual podría estar relacionado al estrés que sufren las células sésiles que forman parte del biofilms. Bibliografía: 1) Rivas M, Sosa-Estani S, Rangel J, Caletti MG, Vallés P, Roldán CD, Balbi L, Marsano de Mollar MC, Amoedo D, Miliwebsky E, Chinen I, Hoekstra RM, Mead P, Griffin PM. Risk factors for sporadic Shiga toxin-producing Escherichia coli infections in children, Argentina.Emerg Infect Dis. 2008 May;14(5):763-71. 2) Leotta GA, Miliwebsky ES, Chinen I, Espinosa EM, Azzopardi K, Tennant SM, Robins-Browne RM, Rivas M.Characterisation of Shiga toxin-producing E. coli O157 strains isolated from humans in Argentina, Australia and New Zealand. BMC Microbiol. 2008 Mar 17;8:46. 3) Costerton W, Veeh R, Shirtliff M, Passmore M, Post C, Ehrlich G. The applicacion of biofilm science to the study and control of chronic bacterial infections. J Clin Invest. 2003; 112: 1466-77. 4) Becerra, C.; Eraso, A.; Albesa, I. Comparison of oxidative stress induced by ciprofloxacin and pyoverdin in bacteria and in leukocytes to evaluate toxicity. J Photochem Photobiol B. 2005 Jan 14;78(1):77-83. 5) 24- Benzie IFF and Strain JJ. Ferric reducing/antioxidant power assay: direct measure of total antioxidant activity of biological fluids and modified version for simultaneous measurement of total antioxidant power and ascorbic acid concentration. En: Methods Enzymol. Oxidants and antioxidants. Part A. Packer L (ed.). California: Academic Press; 1999. Vol 299. Cap. 2. p. 15-27. 6) Krüger A, Lucchesi PMA, Parma AE. Verotoxins in bovine and meat Verotoxin-Producing Escherichia coli isolates: type, number of variants and relationship to cytotoxicity. Applied and Environmental Microbiology. 2011. Resumen: Máximo 300 palabras, manteniendo el formato preestablecido con justificación en ambos márgenes. Sugerimos incluir objetivos, metodología, alguna referencia sobre el marco teórico, avances o conclusiones. Es importante que el envío de resúmenes sea realizado en formato word para su posterior protocolización. Una vez completado, enviarlo por mail a jovenesinvestigadores@sae.unc.edu.ar indicando como asunto y en el archivo adjunto el apellido y nombres del primer autor junto con la unidad académica. Por ejemplo: para el autor Juan Manuel Perez de la Facultad de Artes el envío sería: asunto Juan Manuel Perez FA. VI. BIBLIOGRAFÍA 1- Rivas M, Sosa-Estani S, Rangel J, Caletti MG, Vallés P, Roldán CD, Balbi L, Marsano de Mollar MC, Amoedo D, Miliwebsky E, Chinen I, Hoekstra RM, Mead P, Griffin PM. Risk factors for sporadic Shiga toxin-producing Escherichia coli infections in children, Argentina.Emerg Infect Dis. 2008 May;14(5):763-71.