Efecto de macrófagos sobre biofilms de Candida tropicalis y Candida parapsilopsis.

ARCE MIRANDA JULIO E, BARONETTI JOSÉ L, BOTIGLIERI MARINA, SOTOMAYOR CLAUDIA E, PARAJE MARÍA G.

Posadas

Congreso; XII Congreso Argentino de Micología y XXII Jornadas Argentinas de Micología.; 2011

Candida es uno de los principales patógenos causantes de infecciones intrahospitalarias. Recientemente se ha descripto la capacidad de estos microorganismos de formar biofilms, formando una compleja estructura tridimensional constituida por ambos morfotipos (levaduriforme e hifal). Nuestro objetivo fue evaluar la interacción biofilms-células de la inmunidad innata a través del estudio de las  alteraciones en los metabolitos oxidativos y mecanismos de defensa antioxidante desarrollados en biofilms de Candida tropicalis y Candida parapsilopsis en presencia de macrófagos (Mø). Metodología Se estudió la formación de biofilms en dos cepas clínicas de Candida tropicalis y Candida parapsilopsis, respectivamente. La cuantificación de la formación de biofilms se realizó por la técnica descripta por O?Tool & Kolter en placas de ELISA y determinación espectrofotométrica. Se realizó una co-incubación (30:1) de los biofilms maduros de Candida con Mø de la línea celular RAW 264 y se incubaron por 24 hs a 37º C. Posteriormente se determinó: las unidades de biomasa de biofilms (UBB) con cristal violeta, las especies reactivas del oxigeno (ERO) por Azul de Nitrotretrazolium, las especies reactivas del nitrógeno (ERN) por técnica de Griess. El análisis de los sistemas antioxidadntes fue estudiada por la activación de la enzima superóxido dismutasa (SOD) por el ensayo con metionina, riboflavina y NBT. La enzima catalasa fue cuantificada según el ensayo de Sinha y la capacidad antioxidante del biofilms fue realizado por el ensayo de FRAP (Ferrous reduction antioxidant potency). Resultados Se observó una marcada disminución en la formación de biofilms de Candida tropicalis y Candida parapsilopsis (p˂0,020) en el co-cultivo con Mø, acompañado de un aumento en los niveles intracelulares de ERO (p˂0,030). Sin embargo, la producción de metabolitos extracelulares de ERO y ERN no fueron modificadas significativamente. Cuando se estudió los sistemas de defensa antioxidante, no se observaron alteraciones de SOD, a diferencia de Catalasa en donde se observó un incremento significativo del co-cultivo de C. no albicans-Mø (p˂0,005), con un aumento de la capacidad antioxidante total del sistema (FRAP). Conclusiones La presencia de Mø sobre el biofilms altera el equilibrio oxidativo del sistema con un incremento en la producción de ERO intracelular, lo cual podría estar relacionado a la disminución en la biomasa del biofilms maduro. Además, el sistema pone en marcha mecanismos antioxidantes (aumento de FRAP y Catalasa) como una contrarespuesta a la inducción de ERO. Por lo tanto, los Mø pudieron interactuar con biofilms ya formados de  especies de Candida tropicalis y Candida parapsilopsis, con modificación del balance oxidativo y niveles de biomasa, lo cual podría ser de gran interés en la defensa del huésped.