Estrés oxidativo y nitrosativo en la fotoinactivación de biofilms de Candida tropicalis mediada por parietina

MARIONI JULIANA; BORSARELLI, CLAUDIO D.; MUGAS, M. LAURA; GÓMEZ TOMÁS I; NUÑEZ MONTOYA SC

Rosario, Santa Fe

Congreso; VI REUNIÓN DE FOTOBIÓLOGOS MOLECULARES. GRUPO ARGENTINO DE FOTOBIOLOGÍA, GRAFOB; 2022

Grupo Argentino de Fotobiología

Parietina, es una antraquinona natural aislada del liquen Telochistes nodulifer (Nyl.) Hillman (Teloschistaceae), que hemos caracterizado como un fotosensibilizante Tipo I (O2?-) y II (1O2) [1]. A su vez, en resultados recientes determinamos que PTN produce fotoinactivación in vitro de biofilms de Candida tropicalis al ser irradiada con luz actínica [2]. El objetivo del presente trabajo fue evaluar el estrés oxidativo y nitrosativo, así como la respuesta antioxidante del biofilm como consecuencia del efecto fotodinámico de PTN.La pureza de PTN fue determinada por HPLC. Se evaluó la actividad fotodinámica de PTN en biofilms de C. tropicalis NCPF 3111 de 48 h de crecimiento. El biofilm se expuso a 5 concentraciones de PTN: a la Concentración Inhibitoria Mínima (CIM), CIM/2, CIMx2, CIMx4 y CIMx6. El ensayo se realizó en condiciones de oscuridad e irradiación durante 15 min con una lámpara actínica (Philips TL/03 420 nm). La cuantificación del biofilms se realizó por recuento de unidades formadoras de colonia (UFC/mL). El sobrenadante se separó para medir la producción de O2?- por la reacción de Nitro-Blue tetrazolio (NBT), y la generación de óxido nítrico (NO) por la técnica de Griess. La capacidad antioxidante total del sistema se estudió con el ensayo FRAP (Ferrous Reduction Antioxidant Potency) y la activación de la enzima superóxido dismutasa por el ensayo de NBT. A su vez, se evaluó el mecanismo de acción fotodinámico con 200 mM de azida de sodio (NaN3, secuestrante de 1O2) o Tiron (secuestrante de O2?-). La fotoestimulación de PTN produjo una disminución de 4 log en la viabilidad del biofilms de C. tropicalis a la CIMx2. La fotinactivación de PTN fue revertida parcialmente con NaN3, mientras que con Tiron se suprimió totalmente el efecto fotodinamico. A la CIMx2, la producción de O2?- y NO se incrementó significativamente. Además, se observó un aumento en la actividad de la enzima SOD y la capacidad antioxidante total del biofilm. Sin embargo, la activación de estos sistemas antioxidantes no fueron suficientes para contrarrestar la inactivación fotodinámica antimicrobiana. Estos ensayos demuestran que la fotoinactivación del biofilms de C. tropicalis por PTN está mediada principalmente por O2?-, acompañada de un desbalance nitrosativo y con una contribución menor de 1O2 producido por el mecanismo fotosensibilizante Tipo I.