Characterization of hiPSC-derived extracellular vesicles

HERRERA LOPEZ M; CACERES A; REMEDI, MONICA; MOYANO AL; GASTALDI L

Cordoba

Jornada; XXII Jornadas Científicas de la Sociedad de Biología de Córdoba; 2019

Sociedad de Biología de Córdoba

Las células madre pluripotentes inducidas humanas (hiPSC) obtenidas de células somáticas reprogramadas han abierto un área completamente nueva en la biología de células madre tanto para su aplicación en terapia celular como modelo experimental. En los últimos años, ha sido demostrado que solo una pequeña proporción de las células madre trasplantadas puede alcanzar y diferenciarse en el sitio de la lesión y sus efectos regenerativos dependen en gran parte de vesículas extracelulares (VE) y otras moléculas bioactivas secretadas por estas células. Las VE derivadas de células madre ejercen en parte sus efectos a través de mecanismos paracrinos mediados por microARNs (miARNs) y otras moléculas bioactivas capaces de promover la regeneración y la recuperación funcional de modelos animales de enfermedades del sistema nervioso central (SNC).Las VE secretadas por células progenitoras neurales (NPC) de ratones también ejercen efectos terapéuticos y por lo tanto podrían ser aplicadas para el desarrollo de terapias que promuevan la regeneración del SNC en enfermedades crónicas que no tienen tratamientos específicos. Con estos antecedentes, planteamos la hipótesis de que las VE derivadas de NPC humanas (hNPC) podrían modular la neuroinflamación y promover mecanismos regenerativos endógenos del SNC. El objetivo general es caracterizar de forma integral las hNPC-VE y determinar sus propiedades terapéuticas en modelos experimentales del SNC. Métodos: las VE fueron aisladas por centrifugación diferencial a 100000xg luego de filtrar (0,22 µm) el sobrenadante remanente después de eliminar VE sedimentadas a 2000xg y 16000xg en medios de cultivo obtenidos de hiPSC y hNPC. Para determinar la distribución de tamaños y caracterizar las VE aisladas de hiPSC y hNPC fueron analizadas por microscopía electrónica (ME) y dispersión dinámica de la luz (DLS). Estos resultados preliminares mostraron que las VE presentan tamaño característico de exosomas (~200 nm) con características morfológicas y composicionales únicas, diferenciadas de aquellas secretadas a distintos estadios de diferenciación (hiPSC y hNPC).