Caracterización molecular de Plasmopara halstedii en Argentina

GARAYALDE A.; ERREGUERENA I; MARTÍNEZ L; ARMANDO L; QUIROZ F.; CARRERA A.

Bahía Blanca

Congreso; XI Simposio Nacional de Biotecnología RedBio 2017; 2017

Cerzos-Conicet

BV48El mildiu del girasol es una enfermedad que impacta en la producción a nivel mundial. En Argentina es una de las cincoprincipales patologías que afectan al cultivo. Su agente causal es el oomycete Plasmopara halstedii. Este organismo poseecompatibilidad básica con el girasol pero existen genes altamenteespecializados en la planta (genes R: Pln)cuyos productos son capaces de reconocer los efectores específicos del patógenoen una interacción gen-a-gen. Este patógeno especialista ha demostrado poseer capacidadde superar estos genes mayores gracias a que genera variabilidad genética pormutación y recombinación sexual-asexual. El objetivo fue la caracterizacióngenética de variantes de P. halstedii ysu relación con la aparición de perfiles más virulentos recientemente en Argentina.Se obtuvieron aislamientos colectados en Prov. de Bs. As y Sta. Fe en doscampañas. Se extrajo ADN total (método CTAB) a partir de tejido foliar. Seutilizaron iniciadores específicos basados en secuencias de cinco loci ESTs que solo amplifican el ADN delhuésped por PCR. Se analizó la secuencia de nucleótidos y de aminoácidospredicha de los fragmentos amplificados en las bases NCBI, Pfam y UniProt. Lalocalización celular de las proteínas fue predicha con la plataforma CELLO. El análisisde secuencias se complementó con una caracterización de los aislamientos enbase a la respuesta de un set definido de líneas de girasol portadoras dediferentes genes Pl (líneasdiferenciales) para obtener información de raza. A fin de evaluar la sensibilidadde la técnica se realizó un experimento adicional de extracción de ADN a partirde mezclas artificiales con diferentes proporciones de tejido visiblementeinfectado y sano proveniente de la misma planta.Se encontraron diferencias entre las secuenciasde los aislamientos de Argentina que consistieron en polimorfismos tipo SNPs eINDELs en los loci Pha39, Pha42, Pha43,Pha74 y Pha106. El análisis sobrelíneas diferenciales mostró que los mismos corresponden a la raza 710.  Se encontraron además diferencias en el ADNcon la misma raza descripta en Francia.Los loci ESTs corresponden a proteínas de P. halstedii con funciones entransducción de la vía del AMPc, transporte en membrana, respuesta a estrésy una directamente relacionada con la patogenicidad, codificante de efectorespost-haustoriales RXLR. La localización subcelular resultócitoplasma/mitocondria, retículo endoplasmático, membrana plasmática yextracelular/nuclear, respectivamente.Las mezclas artificiales demostraronque la técnica de extracción y amplificación posee una alta sensibilidad parala detección del patógeno en hoja aun cuando la misma no presenta síntomas externos, lo cual se condice con el crecimiento sistémico del micelio y con lanaturaleza biótrofa del patógeno.Este trabajo constituye la primera caracterización molecular P. halstedii en Argentina y aporta información para el diseño de estrategias integradas de control de la enfermedad.