Búsqueda de nuevos marcadores moleculares para el estudio de diversidad genética en vicuñas.

VALDECANTOS P; LONGO, A. E.; MICELI DORA C

Tucuman

Congreso; I Congreso Latinoamericano (IV Argentino) de Conservación de la Biodiversidad.; 2010

Universidad Nacional de Tucumán-Fac. de Ciencias Naturales e Instituto Miguel Lillo

La técnica de amplificación al azar de ADN polimórfico (RAPD) ha sido muy utilizada en estudios de variabilidad genética de poblaciones en diferentes organismos y en la identificación de marcadores genéticos. Mediante el uso de cebadores de secuencia arbitraria, se amplifican al azar por PCR varios loci, generando una serie de fragmentos; las diferencias entre individuos están dadas por la ausencia de fragmentos no amplificados debido a modificaciones en las secuencias de ADN. Con el objeto de identificar polimorfismos de nucleótido único (SNPs) en el genoma de la vicuña, hemos abordado de manera diferente la utilización de esta metodología. Se utilizaron 10 cebadores de secuencia arbitraria para amplificar, bajo condiciones poco restrictivas, un pool de muestras de ADN de 10 vicuñas de INTA Abra Pampa, Jujuy. Los fragmentos amplificados fueron separados mediante electroforesis en geles de agarosa al 1,5% teñidos con GelGreen. Cada cebador generó un perfil de bandas característico, con tamaños comprendidos entre 200 a 2.000 pares de bases (pb). Los productos amplificados son potenciales sitios de secuencia marcada (STSs) del genoma de la vicuña. Cinco fragmentos fueron clonados y secuenciados. Se diseñaron cebadores específicos para amplificar dichas secuencias en 20 muestras de ADN de vicuñas tomadas al azar. Se obtuvieron productos de amplificación únicos, indicando que todos los individuos comparten los mismos loci. La secuenciación de estos fragmentos específicos y la comparación de sus secuencias, reveló la existencia de SNPs en 3 STS: secuencia A2 (587 pb), transición (A/G) en nucleótido (nt) 289; secuencia V03A (990 pb), transición (A/G) en nt 679; secuencia V03B (1.085 pb), transiciones (C/T), en nt 610 y 867 y (A/G) en 706 y transversión (A/C) en nt 631. La detección de estos polimorfismos mediante técnicas como el ARMS PCR permitirá conocer la frecuencia de distribución de éstos en poblaciones de vicuñas.