Identificación de genes de Pseudomonas putida KT2440 relacionados con la tolerancia al estrés salino en rizosfera.

COSTA GUTIERREZ, STEFANIE BERNARDETTE; VINCENT, PAULA ANDREA; CARAM DI SANTO, CAROLINA M; ESPINOSA-URGEL, MANUEL; ZENOFF, ANA M; DE CRITÓBAL, RICARDO EZEQUIEL

Mar del Plata

Congreso; IV CAMAyA IV Congreso Argentino de Microbiología Agrícola y Ambiental; 2018

Asociación Argentina de Microbiología

La rizósfera de las plantas constituye un nicho donde la proliferación de determinados microorganismos está favorecida por la liberación de nutrientes en forma de exudados radiculares. Las bacterias que ejercen efecto beneficioso para la planta se conocen como PGPR (Plant Growth Promoting Rhizobacteria). En algunos suelos agrícolas la presencia de sales solubles ocasiona problemas de crecimiento en las plantas, respecto a esto, ciertas PGPR pueden mitigar este efecto mediante diversos mecanismos. El objetivo de este trabajo fue obtener, mediante un método de selección acelerada, mutantes de P. putida KT2440 adaptadas a la rizósfera de soja y maíz en condiciones salinas (Kuiper y col., 2001). Evaluar la cepa salvaje KT2440, conocida PGPR, y las mutantes obtenidas, respecto a la tolerancia al estrés salino y su efecto promotor de crecimiento en soja y maíz. Además, identificar los genes involucrados. Para ello, se realizó mutagénesis al azar utilizando el transposón mini Tn5-Km, el pool de mutantes fue inoculado en plantas de soja y maíz crecidas en arena estéril, en condiciones salinas (80 y 100 mM NaCl, respectivamente). Las plantas se mantuvieron durante 14 días (1° ciclo), se recuperaron las bacterias asociadas a la raíz y éstas fueron reinoculadas en nuevas plantas (2° ciclo). Tras 5 ciclos, se recuperaron las bacterias en placas con medio selectivo. Dichas bacterias se evaluaron por su tolerancia a la salinidad en medio de cultivo y su efecto promotor de crecimiento en soja y maíz en suelos salinos. Mediante PCR y secuenciación se determinó el sitio de inserción del transposón. Finalizadas las rondas de selección se recuperaron 500 bacterias y cinco de ellas mostraron ser más tolerantes a la salinidad comparadas con la cepa KT2440. El efecto promotor de crecimiento de las mutantes fue evidenciado en soja y maíz en suelos salinos, en relación con las plantas inoculadas con la cepa salvaje. Además, el sitio de inserción del transposón fue identificado en un gen que codifica para la proteína de adhesión LapA, que participa en la formación de biopelículas.