Análisis de los parámetros morfológicos de gotas lipídicas de células HepG2 tratadas con aceite esencial de Lippia alba quimiotipo tagetenona

MONTERO VILLEGAS S; CASTRO A; GARCIA DE BRAVO M.; POLO M; VES-LOSADA A; RODENAK-KLADNIEW B; CRESPO R

San Luis

Jornada; VII Jornadas de Bioquímica y Biología Molecular de Lipidos y Lipoproteínas; 2017

Los aceites esenciales de quimiotipos de Lippia alba, un arbusto ampliamente utilizado como medicina tradicional en América Latina, se promueven hoy como un medio eficaz para eliminar los problemas causados por la hiperlipemia. Se planteó la hipótesis de que los aceites esenciales de L.alba (AEL) inhiben la síntesis de colesterol y triacilglicéridos y disminuyen los depósitos intracelulares de los lípidos (gotas lipídicas), mecanismos que implican la inducción de una respuesta hipolipidémica. Previamente demostramos in vitro que distintos AELs tiene efectos hipocolesterogénicos dentro de un rango de concentración de 3,2-32 μg/mL, siendo el IC50sc (concentración que inhibe la síntesis de colesterol en 50%) igual a 4 μg/mL para el quimiotipo tagetenona . Usando acetato como precursor radiactivo, los lípidos insaponificables de células HepG2 manifestaron una disminución en la incorporación de [14C] en escualeno, lanosterol, latosterol y colesterol, pero no en ubiquinona, lo que sugiere una inhibición de las enzimas de la vía del mevalonato (VM) aguas abajo del farnesilo pirofosfato. El aceite esencial del quimiotipo tagetenona (AELta) fue el más eficaz y disminuyó los niveles de proteína de la enzima reguladora de la VM, la HMG-CoA reductasa.Para determinar si los cambios ocasionados por el AELta en la incorporación de acetato en los distintos lípidos celulares se traducen en cambios en el contenido de los mismos, se extrajeron los lípidos totales de células HepG2 luego del tratamiento con AELta y las distintas fracciones lipídicas fueron separadas y cuantificadas. El tratamiento de células HepG2 con AELta modificó el contenido celular de triacilglicéridos y de ésteres de colesterol. Se estudió entonces el efecto de éste aceite esencial sobre la población de gotas lipídicas citoplasmáticas (GL), principales organoides de almacenamiento de estos lípidos en las células. Para ello, células -sembradas en cubreobjetos- en fase exponencial de crecimiento fueron tratadas con 4 μg/mL (1,0x IC50sc) y 16 μg/mL (4,0x IC50sc) de AELta durante 48 horas y luego fijadas y teñidas con DAPI y BODIPY 493/503. A partir de las imágenes obtenidas por microscopía de fluorescencia, se evaluaron parámetros morfológicos de la población de GL a partir de medidas del diámetro de cada GL. Para el análisis estadístico se utilizaron pruebas no paramétricas dado que la prueba de Kolmogorov-Smirnov con corrección de Lilliefors demostró que éste parámetro morfológico no presenta una distribución normal. El diámetro de las GL presentes en células tratadas con el aceite resultó menor que el de las células control. Además se encontraron diferencias significativas entre tratamientos, siendo las GL de las células tratadas con 4,0x IC50sc de AELta las de menor tamaño. Se evaluó la distribución de tamaños en la población de GL. Basado en los cuartiles calculados para las GL de las células control, se generaron tres grupos de GL de acuerdo al tamaño: pequeñas (≤0,51 μm), medianas (entre 0,51 μm y 1,02 μm), y grandes (>1,02 μm). Al analizar las proporciones de estos tres grupos, utilizando la prueba de chi cuadrado y posterior corrección de Bonferroni, se encontraron diferencias significativas entre el control y los tratamientos. Las células tratadas con AELta presentaron una mayor proporción de GL pequeñas que el control. Este incremento se da a expensas de una disminución de GL grandes y medianas cuando la concentración ensayada fue de 4,0x IC50sc y sólo de GL grandes cuando se utilizó 1,0x IC50sc de AELta. Se calculó también el número y volumen total de las GL por célula (considerándolas como esferas). No se observaron diferencias significativas en el número de GL por célula con ninguna de las concentraciones de AELta utilizadas. Mientras que en el caso del volumen total, la mediana obtenida para las células tratadas [9,39 μm3 (6,42; 10,25) para IC50sc y 4,87 μm3 (4,50; 8,75) para 4,0x IC50sc] fue menor que para las células control [28,58 μm3 (21,58; 39,24)] siendo la diferencia estadísticamente significativa para la concentración correspondiente a 4,0x IC50sc.Este trabajo demostró que AELta además de disminuir la síntesis de colesterol y triacilglicéridos disminuye la acumulación de lípidos de almacenamiento intracelular, dos eventos celulares frecuentemente asociados con una respuesta hipolipidémica.