Regulación dinámica de ATP extracelular en E. coli

CORA LILIA ALVAREZ; IRENE MARGINEDAS FREIXA; SABINA MATÉ; VANESA HERLAX; GERARDO CORRADI; MARA FLORENCIA LEAL DENIS; NATALIA LAURI; VERÓNICA MILESI; NICOLÁS ENRIQUE; PABLO SCHWARZBAUM,; MARIANO OSTUNI

La Plata

Congreso; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología (SAFIS); 2016

Sociedad Argentina de Fisiología

Estudiamos la regulación dinámica de ATP extracelular (ATPe) en Escherichia coli, que depende de la liberación de ATP y de la hidrólisis de ATPe (actividad ATPasa).Utilizamos distintos contextos: E. coli aisladas, vesículas de membrana externa (OMVs) purificadas de E. coli, E. coli co-incubadas con células intestinales Caco-2 y E. coli en perfusiones de segmentos intestinales de rata (SI). La [ATPe] fue monitoreada de manera contínua por luminometría. La actividad ATPasa fue estimada por luminometría y por un método radioactivo.En E. coli y OMVs, la liberación de ATP fue inducida por exposición a los péptidos melitina (MEL) y mastoparan 7 (MST7), mientras que en Caco-2 y SI, la liberación de ATP fue inducida por agregado de E. coli.En E. coli y OMVs, la actividad ATPasa aumentó linealmente con [ATPe] (0.1-1 µM). Además, la actividad ATPasa de E. coli aumentó 3.6 veces en medios sin fosfato, y se redujo 60% en presencia de AMP-CPP, un análogo no hidrolizable de ATP. En OMVs y en E. coli, la [ATPe] se mantuvo estable en ausencia de estimulo y aumentó de manera aguda 3 y 7 veces con el agregado de MST7 y MEL, respectivamente. En células Caco-2, el agregado de E. coli indujo un aumento de [ATPe] hasta un máximo, seguido de una rápida disminución, lo que sugiere una alta actividad hidrolítica de ATPe. La incubación con carbenoxolona (inhibidor de la salida de ATP) disminuyó 80% la [ATPe] inducida por E. coli. En SI, la perfusión de E. coli provocó un aumento del doble en la [ATP] del lumen, respecto a sus niveles basales. En resumen, la regulación de ATPe en E. coli depende del balance dinámico entre la actividad ATPasa y la liberación de ATP al medio extracelular. Ese balance podría ser alterado por las OMVs, ya que éstas poseen su propia capacidad de regular ATPe. Además, E. coli es capaz de inducir liberación de ATP tanto en las células Caco-2 como en SI. Los resultados sugieren un importante papel de E. coli en la regulación de ATPe del lumen intestinal in vivo. Con subsidios UBACYT (20020130100027BA), PICT 2014-0327, CONICET (PIP 20110100639 Y 11220150100459) y ECOS Sud (Francia)-MINCYT(Argentina) A15S01, PDTS-CIN 193.