18) Mecanismos moleculares que determinan el rol pro amiloidogénico de la apolipoproteína A-I

ROSU, S. A.; FINARELLI, G. S.; PRIETO, E. D.; RAMELLA, N.; SCHINELLA, G; GADDI, G. M.; GISONNO, R.; TRICERRI, M. A.

La Plata

Jornada; Primeras Jornadas Conjuntas de Educación Médica, Extensión e Investigación 2016; 2016

Facultad de Ciencias Médicas, UNLP

Introducción: Las amiloidosis son patologías crónicas, en las que proteínas mal plegadas inducen citotoxicidad de distinta severidad y en distintos órganos. La amiloidosis inducida por mutantes naturales de la apolipoproteína A-I humana (apoA-I) se presenta con diversas manifestaciones clínicas dependiendo de la variante proteica que se encuentra involucrada1. En estudios previos determinamos que la conformación proteica puede sufrir alteraciones estructurales inducidas por parámetros pro-inflamatorios del micro ambiente que favorecen un procesamiento patogénico 2,3.Objetivos: En este trabajo examinamos el efecto de mutaciones puntuales sobre la estructura, estabilidad y tendencia a la agregación de estas proteínas, así como su habilidad para unirse a ligandos del microambiente y de desencadenar respuestas celulares.Materiales y métodos: Las proteínas fueron incubadas en distintas condiciones (pH bajo, presencia de ligandos, enzimas proteolíticas, etc), y parámetros estructurales asociados al plegamiento proteico fueron analizados por fluorescencia, microscopía u otras técnicas biofísicas y bioquímicas. Respuestas celulares fueron estudiadas mediante ELISA.Resultados: Nuestros resultados indican que todas las variantes analizadas en condiciones de pH fisiológico (Gly26Arg, Lys107-0, Arg173Pro y Leu60Arg) son menos estables que la Wt. Arg173Pro muestra mayor tendencia a la proteólisis parcial, y menos eficiencia para solubilizar fosfolípidos, lo cual podría determinar su mayor tendencia a rendir conformaciones de la proteína libre que sean más susceptibles a agregarse y/o perder función. Pero además esta mutante se une más eficientemente a heparina, lo que podría explicar una mayor retención en un micro ambiente inflamatorio. Lys107-0 muestra mayor tendencia a agregarse que Gly26Arg, aunque, de manera interesante Gly26Arg y Arg173Pro (pero No Lys107-0) aumenta la activación de macrófagos, estimulando por tanto el ambiente inflamatorio local.Conclusiones: Nuestros resultados sugieren que las variantes mutantes de apoA-I comparten mecanismos de patogenicidad con otras proteínas amiloidogénicas. Si bien la estabilidad estructural es probable que favorezca la agregación, es sugestivo que pequeños cambios conformacionales alteren su interacción con ligandos o susceptibilidad a proteólisis. Futuros estudios serán dirigidos para profundizar en los complejos mecanismos que determinan el delicado equilibrio en la relación estructura-función de esta proteínaReferencias(1) Eriksson M, Schonland S, Yumlu S, et al. J Mol Diagn 2009: 11: 257?262. (2) Ramella NA, Rimoldi OJ, Prieto ED et al. PLoS ONE 2011; 6(7): e22532. (3) Rosú, S.A. et al. PLoS One. 2015 May 7;10(5):e0124946. doi: 10.1371Este trabajo fue subsidiado por UNLP (M158 y 187); CONICET (PIP 112 201101-00648)