La síntesis de novo de glycerolípidos aumenta durante la diferenciación de macrófagos en concordancia con el incremento de la expresión de GPAT3

QUIROGA, I.Y.; GONZALEZ, M.C.; PELLON-MAISON, M.; GONZALEZ BARO, M.R.

La Plata

Congreso; Primer Congreso Internacional de la Facultad de Ciencias Médicas de la UNLP; 2013

FCM-UNLP

Patologías como la diabetes tipo 2 y la obesidad se caracterizan por un desbalance en el metabolismo energético que ocasiona un exceso en los depósitos de triacilgliceroles (TAG) en el hígado. En este sistema, dos enzimas mitocondriales poseen un papel fundamental: la glicerol-3-fosfato aciltransferasa (GPAT), que cataliza el primer paso de la síntesis de novo de glicerolípidos celulares, y la carnitina aciltransferasa 1a (CPT1a), cuya función es transesterificar los acil-CoAs como ésteres de carnitina para su ingreso en la mitocondria y posterior oxidación.  Ambas enzimas son consideradas los pasos limitantes de cada vía y están regulados en forma recíproca. Con el objetivo de evaluar si estas enzimas mitocondriales también juegan un papel importante en otro modelo de acumulación de TAG, evaluamos sus niveles de expresión en dos líneas celulares: las RAW 264 derivadas de macrófagos de ratón y las THP1 de monocitos humanos. Las mismas fueron tratadas a diferentes tiempos con LDL oxidadas a fin de diferenciarlas en células espumosas y macrófagos respectivamente. Estos eventos se dan en forma característica  durante la formación de placas aterogénicas e involucran un importante aumento en la acumulación de lípidos. Mediante RT-PCR pudimos observar que en ambos modelos el nivel de expresión de GPAT1 no varía, por lo cual evaluamos si el aumento de TAG podría depender de  las otras isoformas de GPAT, la isoforma 2 mitocondrial o las 3 y 4 ubicadas en el retículo endoplásmico. Interesantemente pudimos observar un aumento significativo de la GPAT3, mientras que el resto de las isoformas presentaron un nivel de expresión basal o nulo. Estos resultados coincidieron con los de ensayos de medición de actividad GPAT, en los cual fue posible distinguir entre la actividad de GPAT1 [resistente a las sustancias reactivas a grupos SH-, tales como N-etil maleimida (NEM)] que resultó minoritaria y la sensible a dicho compuesto que fue mayoritaria y correspondería a las isoformas 2, 3 y/o 4. Por otro lado, pudimos comprobar que  CPT1a aumenta significativamente su expresión durante la diferenciación de macrófagos a célula espumosas en la línea RAW 264, mientras que disminuye significativamente en la diferenciación de monocitos a macrófagos en las THP1, dando cuenta de un  nivel de beta-oxidación diferencial en función de los distintos requerimientos energéticos a pesar de que el balance síntesis-oxidación  tienda a la acumulación de TAG en ambos tipos celulares.