Construcción de adenovectores y magnetoadenovectores para aplicaciones de terapia génica en el miocardio senil

DE LUCA YANINA; PEREYRA ANDREA; GOYA R; DELBONO OSVALDO; MATTIAZZI ALICIA; HEREÑU C

La Plata

Jornada; Jornadas de presentación de trabajos Medicina 2010; 2010

El factor de crecimiento insulino-simil (IGF-I) es un polipéptido de 72 kDa (70 aa), que se produce en el hígado en respuesta a la hormona de crecimiento. Este factor ha demostrado tener una íntima relación con la promoción de la longevidad en diferentes especies y diversos trabajos han demostrado su acción cardioprotectora, fundamentalmente en el remodelamiento miocárdico por isquemia/reperfusión (1).Estudios previos de terapia génica con un vector adenoviral recombinante replicación defectivo portador del cDNA que codifica para el IGF-I se han llevado a cabo con éxito en ratas con deterioro de la síntesis dopaminérgica neuronal (2). La construcción de un nuevo sistema adenoviral bidireccional regulable que exprese simultáneamente IGF-I y un gen reportero para la proteína fluorescente verde (GFP) daría idea del éxito y eficiencia de la transfección y además permitiría la manipulación de la expresión de nuestro factor de interés, IGF-I. Por otro lado, la asociación de los vectores virales con la nanotecnología ofrece la posibilidad de desarrollar estrategias de terapia génica mínimamente invasivas y de alta eficiencia de infección. Esta estrategia combina Magnetic Drug Targeting (MDT) y magnetofección, dos estrategias novedosas basadas en la utilización de nanopartículas magnéticas (MNP) (3,4). El objetivo de esta técnica es concentrar complejos terapéuticos en áreas de interés del organismo utilizando campos magnéticos potenciando así las posibilidades terapéuticas, en nuestro caso en el miocardio senil . OBJETIVOS Construir un vector bidireccional que permita la coexpresión regulada del gen de IGF-I y GFP, ambos bajo el control de un promotor inducible por doxiciclina. Dicho vector constituirá la unidad funcional de expresión del adenovirus a construirse en pasos futuros. Construir magnetoadenovectores a partir del complejamiento de MNP con nuestros vectores adenovirales recombinantes (RAds) : RAd-GFP (vector control) y RAd-DHPRβ-eYFP (expresa la proteina fluorescente reportera y la subunidad beta del receptor de dihidropiridina) y realizar experimentos de magnetofección in-vitro. CONCLUSIONES Se ha logrado construir exitosamente el shuttle que permitirá la construcción del sistema adenoviral bidireccional regulable. En todos los casos los complejos magnéticos RAd/MNP mostraron una eficiencia de transducción mayor que la del adenovector por sí solo. Prevemos que la transferencia in vivo de genes terapéuticos al miocardio, podría optimizarse significativamente a través del atrapamiento, mediado por un campo magnético externo, de adenovectores magnéticos concentrados en el/los puntos deseados.