Reducción de la hipertrofia cardíaca de ratas espontáneamente hipertensas a través del silenciamiento del receptor del factor de crecimiento epidérmico por RNA de intererencia

DÍAZ RG; CALDIZ CI; ESCUDERO DS; PÉREZ NG; BREA MS; PORTIANSKY EL; MORGAN PE

La Plata

Jornada; Jornadas de Investigación 2018 de la Facultad de Ciencias Médicas de La Plata; 2018

Facultad de Ciencias Médicas de La Plata (UNLP)

Introducción. La Organización Mundial de la Salud informó que las enfermedades cardiovasculares (ECV) son la causa principal de muerte y discapacidad en el mundo, representando el 48% de las muertes por enfermedades no transmisibles. La hipertrofia cardíaca patológica (HCP) actualmente se considera como un factor de riesgo cardiovascular para la falla cardíaca y muerte. En modelos experimentales se ha demostrado que el desarrollo de la HCP se puede limitar a través de la inhibición de la ruta disparada por la Angiotensina II (AngII). En los últimos años se ha descripto que la AngII puede actuar a través de la transactivación del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR o ErbB1). Este receptor es una proteína integral de membrana plasmática de amplia distribución en el organismo y junto con otros miembros de la familia (ErbB2 y ErbB4) son necesarios para una función cardíaca normal. En nuestro laboratorio hemos demostrado que la HCP de ratas espontáneamente hipertensas (SHR) involucra AngII endógena y un aumento de la actividad del intercambiador Sodio/Hidrógeno de membrana (NHE1), cuya inhibición previene el desarrollo de la patología. Objetivos: El objetivo del presente trabajo fue evaluar la progresión de la HCP de ratas SHR frente a un silenciamiento específico y localizado del EGFR cardíaco, mediante un RNA de interferencia (shRNA), suministrado con un lentivirus (l-shEGFR). Asimismo estudiamos si en este sistema la transactivación del EGFR gatillada por la AngII estaba vinculada con la activación del NHE1.Materiales y métodos: Ratas SHR macho de 3-4 meses de edad fueron anestesiadas, se les practicó una toracotomía en el cuarto espacio intercostal y se les inyectaron 200 l de suspensión de lentivirus (l-shEGFR o el control no silenciador, l-shSCR). Se analizó la HCP por ecografía al inicio y fin del tratamiento, y post-sacrificio a través de análisis morfométricos del ventrículo izquierdo (VI). Se cuantificó la expresión proteica del EGFR por medio de electroforesis, seguida de inmunoblots con anticuerpos específicos. Se evaluó la actividad del intercambiador NHE1 en músculos papilares del VI analizando la capacidad de recuperación del pH intracelular luego de una carga ácida disparada con un pulso de cloruro de amonio. Se evaluó la producción de especies reactivas del oxígeno (ROS) mediante quimioluminiscencia (lucigenina) en tiritas aisladas de VI, y el daño oxidativo de las membranas miocárdicas mediante determinación de peroxidación lipídica (TBARS). Resultados: Después de treinta días de inyectado el shRNA, la expresión proteica del EGFR en el VI se redujo en 33.3 ± 3% en comparación con el grupo control sin generar modificaciones en la expresión del ErbB2 o ErbB4. Los parámetros hipertróficos peso corazón / longitud de tibia y peso del VI / longitud de la tibia se redujeron en animales inyectados con l-shEGFR en comparación con ratas inyectadas con l-shSCR. Esta reducción estuvo acompañada por una disminución del área de la sección transversal de los cardiomiocitos. El análisis ecocardiográfico mostró una disminución significativa de la fracción de acortamiento endocárdico al final del tratamiento en el grupo l-shSCR, indicando un deterioro de la función cardíaca, mientras que el grupo l-shEGFR no mostró cambios significativos al final del tratamiento, lo cual se puede interpretar como un mejoramiento de la función. La producción basal de ROS en el VI se redujo significativamente en el grupo inyectado con l-shEGFR en comparación con el 1-shSCR, al igual que la peroxidación lipídica medida por TBARS. Por último, la actividad del NHE1 disminuyó significativamente en los corazones con silenciamiento de EGFR en comparación con el grupo control, mientras que la expresión proteica del intercambiador no se vio afectada por el tratamiento.Conclusiones: Estos resultados demuestran que el bloqueo específico de la expresión proteica del EGFR en el corazón disminuye la hipertrofia cardíaca en el modelo SHR, a través de una vía que implica la reducción del estrés oxidativo y la consiguiente disminución de la actividad del NHE1.