Efecto Inhibitorio de la Hiperosmolaridad sobre la Respuesta de Neutrófilos Activados con Citocalasina B

GIAMBELLUCA MIRIAM S.; GENDE OSCAR A.

Mar del Plata

Congreso; Reunion anual de la SAIC; 2007

Sociedad Argentina de Investigacion Clinica

La exposición de los neutrófilos a medios hipertónicos previa a la estimulación con quimiotácticos los hace incapaces para desarrollar respuestas funcionales.El objetivo de este estudio fue comparar la liberación de especies reactivas del oxigeno (ROS) inducida por fMLP en neutrófilos tratados con citocalasina B (CitB) en medios isotónicos (iso) e hipertónicos (hiper). Se utilizaron neutrófilos aislados de sangre humana mediante centrifugación en un gradiente discontinúo. La concentración de calcio citosólico en los neutrófilos aislados se determinó luego de la incubación con FURA 2-AM y la liberación de ROS al medio extracelular se cuantifico mediante un método que utiliza un marcador fluorescente unido a albumina.Se obtuvieron diferencias significativas (P<0.05) respecto al grupo control (iso sin CitB=100 %) en iso+CitB (688 ± 127%), hiper (64 ± 5%) e hiper+CitB (64 ± 13%). El efecto fue similar cuando el tratamiento con CitB se hizo antes o después de modificar la osmolaridad del medio (aumentando entre 25 y 100 mmoles/l la concentración de NaCl). Paradójicamente cuando se aumentó la osmolaridad luego de estimular a los neutrófilos con fMLP la liberación de ROS aumentó (86.8 ± 6.4% iso vs 115.5 ± 9% hiper). El efecto de la hiperosmolaridad fue reversible recuperándose el 72.5 ± 2.24% de la respuesta 100 seg después de retornar al medio isotónico. Se obtuvo una reducción comparable en la respuesta cuando el aumento de osmolaridad se produjo por el agregado de ClNa, cloruro de N-metilglucamina o sacarosa (hasta el 13.3 ± 2.4%, 20.2 ± 4.3% y 10 ± 4% respectivamente) pero la reducción fue menor cuando se agrego manitol (72.2 ± 6%.del isotónico). El efecto inhibitorio sobre la liberación de ROS se correlacionó con los cambios en el calcio intracelular, mostrando que la hiperosmolaridad actúa sobre la cadena de señalización en un eslabón cercano a la activación del receptor de membrana.