Efecto de la hiperosmolaridad sobre la activación de neutrófilos por agentes quimiotácticos

GIAMBELLUCA M; GENDE OA

Mar del Plata

Congreso; Reunion anual de la SAIC; 2006

saic

Efecto de la hiperosmolaridad sobre la activación de neutrófilos por agentes quimiotácticos En la resucitación del shock hemorragico, la infusión rápida de pequeños volúmenes de solución salina hipertónica moviliza agua desde el compartimento intracelular al intravascular y normaliza la microcirculación. Se ha observado que también reduce la injuria por reperfusión postisquémica, disminuyendo la activación de los leucocitos. Para dilucidar el mecanismo que produce esta respuesta este trabajo evalúa la atenuación de la señal de calcio provocada por quimiotácticos en neutrófilos en soluciones hipertónicas. La concentración de calcio citosólico ([Ca2+]i) en los neutrófilos aislados se determinó luego de la incubación con un indicador fluorescente (FURA 2 AM, 10m g/ml, 30min, 37°C) en una solución salina ([Ca2+]o=1mM). Luego de 10 min de estabilización en solución isotónica (iso, [ClNa]o=140 mM) o hipertónica (hiper, [ClNa]o=240 mM), los neutrófilos (un millón de cél/ml) se estimularon con fMLP 0.1 m M. Se observó una reducción significativa del pico de [Ca2+]i (iso 272± 15.6 nM, hiper 243± 17.5 nM) y un aumento en la velocidad de caída de esta señal (t 50% :iso 38.5 ± 1.67 seg, hiper 33.0 ± 1.96 seg). En soluciones sin calcio extracelular ([Ca2+]o=0, [EGTA]o=0.1mM) se produjo, en medios hipertónicos, una reducción significativa de la señal de [Ca2+]i provocada por la movilización de calcio desde los depósitos intracelulares. Soluciones hipertónicas por agregado de N-metilglucamina o manitol mostraron una depresión similar de la respuesta a quimiotácticos, indicando que este efecto es debido al cambio de osmolaridad y no a la alteración de la composición iónica. Estos cambios en la señal de calcio se traducen posteriormente en alteraciones de la activación de los neutrófilos en condiciones de hiperosmolaridad. En la resucitación del shock hemorragico, la infusión rápida de pequeños volúmenes de solución salina hipertónica moviliza agua desde el compartimento intracelular al intravascular y normaliza la microcirculación. Se ha observado que también reduce la injuria por reperfusión postisquémica, disminuyendo la activación de los leucocitos. Para dilucidar el mecanismo que produce esta respuesta este trabajo evalúa la atenuación de la señal de calcio provocada por quimiotácticos en neutrófilos en soluciones hipertónicas. La concentración de calcio citosólico ([Ca2+]i) en los neutrófilos aislados se determinó luego de la incubación con un indicador fluorescente (FURA 2 AM, 10m g/ml, 30min, 37°C) en una solución salina ([Ca2+]o=1mM). Luego de 10 min de estabilización en solución isotónica (iso, [ClNa]o=140 mM) o hipertónica (hiper, [ClNa]o=240 mM), los neutrófilos (un millón de cél/ml) se estimularon con fMLP 0.1 m M. Se observó una reducción significativa del pico de [Ca2+]i (iso 272± 15.6 nM, hiper 243± 17.5 nM) y un aumento en la velocidad de caída de esta señal (t 50% :iso 38.5 ± 1.67 seg, hiper 33.0 ± 1.96 seg). En soluciones sin calcio extracelular ([Ca2+]o=0, [EGTA]o=0.1mM) se produjo, en medios hipertónicos, una reducción significativa de la señal de [Ca2+]i provocada por la movilización de calcio desde los depósitos intracelulares. Soluciones hipertónicas por agregado de N-metilglucamina o manitol mostraron una depresión similar de la respuesta a quimiotácticos, indicando que este efecto es debido al cambio de osmolaridad y no a la alteración de la composición iónica. Estos cambios en la señal de calcio se traducen posteriormente en alteraciones de la activación de los neutrófilos en condiciones de hiperosmolaridad.