CIC   05421
CENTRO DE INVESTIGACIONES CARDIOVASCULARES "DR. HORACIO EUGENIO CINGOLANI"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Identificación de proteínas blanco de CaMKII en mitocondrias aisladas de corazón
Autor/es:
VALVERDE CA; PELLON M; LANDONI M; COUTO A; MATTIAZZI A
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; Reunión Científica Anual de de la SAFIS; 2010
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Fisiología
Resumen:
La participación de CaMKII en la apoptosis ha sido demostrada hace varios
años. Hemos descrito que la muerte por apoptosis/necrosis inducida por isquemia/reperfusión
(IR) es mediada por CaMKII a nivel del retículo sarcoplasmático (RS) y que
además participan las mitocondrias. No se sabe si proteínas mitocondriales
fosforiladas por CaMKII son responsables de parte del este efecto deletéreo en
la IR. La hipótesis es que el aumento del Ca2+ citosólico y posterior
activación de CaMKII en la IR, podría fosforilar proteínas no sólo del RS (ya
demostrado) sino además de las mitocondrias, por un aumento en la concentración
local de Ca2+ y transferencia en el microdominio mitocondrias-RS.
Esto permitiría una activación de CaMKII allí y la fosforilación de proteínas, afectando
la función mitocondrial y contribuyendo al efecto deletéreo de la CaMKII en la IR. Se propone
estudiar la presencia e identificar proteínas blanco de CaMKII a nivel
mitocondrial o de su interacción con el RS. Para ello se realizó el
aislamiento, purificación y fosforilación in
vitro (iv) con CaMKII y ATP
radiactivo, de mitocondrias de corazón de rata. Se caracterizó el aislamiento y
purificación de mitocondrias y membranas asociadas a mitocondrias por Western
Blot. La fosforilación i.v. con 32P-ATP de
mitocondrias puras y la autorradiografía
de geles SDS-PAGE indicó la fosforilación de al menos 5
proteínas blanco de CaMKII. La fosforilación i.v. en presencia de un inhibidor específico de CaMKII, aún en
presencia de Ca2+ y CaM, señala la especificidad de la fosforilación
por CaMKII de 3 proteínas de las cuales resulta de interés una banda de ~20 KDa.
Por estudio de subfraccionamiento esta banda correspondería a una localización en
membrana externa. Se están realizando estudios por espectrometría de masa para identificar
dicha proteína. Estos resultados demuestran por primera vez la presencia de al
menos una proteína con localización mitocondrial capaz de ser fosforilada por
CaMKII en corazón.