Detección de Lotmaria passim (Trypanosomatidae) mediante PCR en tiempo real en abejas adultas de colonias de la provincia de Buenos Aires, Argentina. Comparación de métodos de detección molecular

BRASESCO C.; BRAVI, M. E.; MAGGI, M. D.; PLISCHUK, S.; GENCHI GARCÍA, M. L.; REYNALDI, F. J.; QUINTANA S.; DI GERÓNIMO, V.; EGUARAS, M.

Mar del Plata

Congreso; IV Congreso Argentino de Microbiología Agrícola y Ambiental - I Jornada de Microbiología General; 2018

Asociación Argentina de Microbiología

La especie de protista Lotmaria passim (Trypanosomatidae) ha sido recientemente descripta como un parásito del tracto digestivo de la abeja melífera (Apis mellifera). Se desconoce aún si se halla presente en la provincia de Buenos Aires, área de mayor productividad apícola de Sudamérica. El objetivo de este estudio fue detectar, mediante ensayos de PCR en tiempo real, la presencia de ADN de L. passim en abejas adultas de colonias de la provincia de Buenos Aires y comparar diferentes pares de cebadores para su detección. Se extrajo ADN total de pooles de 10 abejas adultas provenientes de 24 apiarios en 22 localidades y se realizaron reacciones de PCR en tiempo real con tres pares diferentes de cebadores específicos para detectar la presencia de L. passim, los cuales amplifican fragmentos de 153 y 459 pb a partir del ADN 18S ribosomal y 402 pb a partir del gen GAPDH, respectivamente. Todos los ensayos se llevaron a cabo por triplicado con Evagreen como intercalante fluorescente. Se realizó una amplificación de β-actina de A. mellifera como control interno para verificar la correcta extracción de ADN y la ausencia de inhibidores para evitar falsos negativos. Luego de las amplificaciones, los productos de PCR fueron purificados y secuenciados con el fin de verificar que los mismos correspondieran a L. passim y fueron analizados mediante el software BLAST. De las 24 muestras analizadas, 17 (70%) fueron positivas para L. passim. Existieron diferencias en la prevalencia al analizar los resultados de los diferentes cebadores, lo cual podría deberse a las diferencias en los tamaños de los amplicones, mostrando los de mayor tamaño una menor tasa de detección, probablemente debido a degradación del ADN. Las secuencias de las muestras analizadas mostraron alta homología (99%) con las secuencias de L. passim provenientes de Uruguay, Bélgica y EEUU presentes en el Genbank. Este trabajo demuestra la presencia de L. passim en apiarios de la provincia de Buenos Aires y resalta además la importancia de la utilización de las nuevas técnicas de diagnóstico y de su correcta aplicación. Debido a que se desconocen tanto la virulencia de L. passim como las patologías asociadas a su presencia, urge determinar el impacto de su elevada prevalencia en las poblaciones de A. mellifera de la región.