Comparación de una PCR convencional desarrollada in house y una PCR anidada en el diagnóstico de Necator americanus

SILVIA REPETTO; SERVIAN ANDREA; GRACIELA T. NAVONE; M. LORENA ZONTA

Mar del Plata

Congreso; IV Camaya I Migrogen; 2018

Sociedad Argentina de Microbiología

Ancylostoma duodenale y Necator americanus son los geohelmintos responsables de causar más de 900 millones de infecciones humanas en todo el mundo, siendo N. americanus el más frecuente en América Latina. Sin embargo, no se conocen datos epidemiológicos certeros dado que el diagnóstico se basa principalmente en la identificación de huevos en materia fecal sin poder diferenciar ambas especies. La combinación del coprocultivo con la examinación microscópica permite realizar el diagnóstico diferencial, pero éste resulta laborioso y requiere de microscopistas experimentados. Para superar estas limitaciones, se ha reportado una PCR anidada (N-PCR) de alta sensibilidad y especificidad, pero que tiene la desventaja de contaminación con amplicones, a diferencia de la PCR convencional (C-PCR). El objetivo de este trabajo fue comparar la sensibilidad analítica de la N-PCR reportada y una C-PCR estandarizada in house para el diagnóstico de N. americanus en muestras de heces. Se purificó ADN a partir de materia fecal con huevos y materia fecal no parasitada contaminada con cantidades crecientes de larvas filariformes (1, 30, 50 y 100), utilizando el kit comercial ZR Fecal DNA MiniPrep (Zymo Research). La C-PCR se realizó con un par de cebadores dirigidos contra el ADN del citocromo b del genoma mitocondrial del parásito y la N-PCR con cebadores dirigidos contra el ITS-2 del ADN ribosomal. La sensibilidad se estableció utilizando como templado diluciones en base diez de las muestras de ADN obtenidas. Ambas técnicas permitieron amplificar el ADN obtenido a partir de materia fecal con huevos con la misma sensibilidad y límite de detección. En cuanto al ADN obtenido de larvas, se observó amplificación hasta la dilución 10-2, pero sólo la N-PCR permitió detectar el ADN correspondiente a 1 larva/g de materia fecal. Ambas metodologías presentaron una sensibilidad analítica similar, pero la C-PCR resultó más apropiada para el diagnóstico de N. americanus a partir de muestras de heces, reduciendo el tiempo de diagnóstico, las posibilidades de contaminación y los costos de las pruebas. Esto lo convierte en un método de elección para el diagnóstico de rutina.