Análisis de la variabilidad genómica de Iridovirus de mosquitos (MVI: Mosquito Virus Iridiscente), aislados de poblaciones naturales, mediante la utilización de una biblioteca genómica,

FERRARI, WALTER; SOLEDAD GUEVARA; VICTORIA MICIELI; EVANGELINA MUTTIS; PABLO GHIRINGHELLI

La Rioja

Congreso; XI Jornadas Regionales Sobre Mosquitos; 2018

Área Temática: Taxonomía, Ecología, Genética y Distribución de mosquitosAnálisis de la variabilidad genómica de Iridovirus de mosquitos (MVI: Mosquito Virus Iridiscente), aislados de poblaciones naturales, mediante la utilización de una biblioteca genómica.Soledad R. Guevara1 , Muttis Evangelina1 , Walter Ferrari1 , María V. Micieli1 y Pablo D. Ghiringhelli21 Centro de Estudios Parasitológicos y Vectores (CEPAVE CONICETCCT-La Plata-UNLP) Boulevard 120 S/N, 1900, La Plata, B. A., Argentina.2 LIGBCM-AVI (Laboratorio de Ingeniería Genética y Biología Celular y Molecular - Area Virosis de Insectos), Departamento de Ciencia y Tecnología, Universidad Nacional de Quilmes (UNQ); Roque Saenz Peña 352, (1876) Bernal, Bs. As., Argentina.La familia Iridoviridae comprende virus patógenos tanto de vertebrados como de invertebrados, principalmente insectos pero también crustáceos y moluscos de hábitat acuático o húmedo. Los Iridovirus están caracterizados por su forma icosaédrica y un tamaño aproximado de entre 120 y 300 nm. Otra particularidad de este virus es el efecto óptico que se produce cuando las partículas se encuentran apiladas masivamente a modo de arreglo paracristalino reflejando color iridiscente (King et al., 2012). Los colores pueden variar desde el violeta al turquesa como también desde el verde al naranja (Williams, 2008). Estudios preliminares indican heterogeneidad genética. Poblaciones que comparten lugar y tiempo pueden albergar variantes genéticamente distintas. La cuantificación de la variación intraespecífica en el genoma viral mejoraría nuestra capacidad para definir las especies y representaría un primer paso hacia la comprensión de la relación entre el genotipo y el fenotipo de la infección de estos virus. En el presente trabajo realizamos un estudio de la variación en segmentos del genoma viral de distintos aislamientos virales que presentaron diferentes condiciones, como ser: fenotipo, especie de mosquito, sitio de cría del vector y fecha de colecta. Para ello se llevó a cabo la amplificación de secuencias a partir de cinco oligonucleótidos específicos diseñados a partir de la secuencia de algunos clones correspondientes a una biblioteca genómica obtenida por medio de la digestión de una cepa de referencia (un aislamiento correspondiente a La Granja, Gran La Plata) por la endonucleasa HindIII. La extracción de ADN se realizó con el Kit de Purificación de ADN (WizardGenomic DNA Purification Kit, Promega). Las muestras analizadas correspondieron a 28 larvas de Culex pipiens infectadas con el virus, que fueron recolectadas en zanjas de distintas localidades del partido de La Plata y Berisso y en distintos momentos del año y a dos larvas de Aedes albifasciatus. Los estados inmaduros colectados se revisaron para sintomatología de infección con Iridovirus bajo microscopio estereoscópico bajo fondo oscuro. La identificación de las larvas de 4to estadio se realizó utilizando claves dicotómicas (Mitchell y Darsie 1985; Rossi et al. 2006). Los ejemplares que mostraron iridiscencia fueron conservados a -70ºC hasta su procesamiento. Se utilizaron 3 ejemplares para cada condición evaluada. Se construyó una matriz de presencia/ ausencia de las bandas correspondientes a los cinco primers para cada muestra procesada y se analizó para construir un dendrograma. Los resultados muestran que los segmentos correspondientes a los primers IC28 e IC35 se encuentran mucho más conservados que los otros y que el análisis del patrón de bandas muestra alta variabilidad genética, aunque la misma no pudo ser asociada a ninguno de los factores estudiados. En base a estos resultados se aprecia una heterogeneidad en los aislamientos que no estaría mostrando presencia de diferentes cepas sino más bien una cepa altamente variable.