AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIÓN DE UNA CEPA ENTOMOPATÓGENA DE Photorhabdus luminescens OBTENIDA A PARTIR DE UNA POBLACIÓN NATIVA DE Heterorhabditis bacteriophora (Nematoda)

GRACIELA BENINTENDE; FERNANDA ACHINELLI; LEOPOLDO PALMA; DIEGO SAUKA ; DANIEL GHIRINGHELLI; MARIANO BELAICH; NANCI LOPEZ; WALTER FERRARI; DAIANA ELICECHE

MAR DEL PLATA

Congreso; IV CONGRESO ARGENTINO DE MICROBIOLOGIA Y I JORNADA DE MICROBIOLOGIA GENERAL; 2018

AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIÓN DE UNA CEPA ENTOMOPATÓGENA DEPhotorhabdus luminescens OBTENIDA A PARTIR DE UNA POBLACIÓN NATIVA DEHeterorhabditis bacteriophora (Nematoda)Daiana Eliceche (1), Leopoldo Palma (2), Walter Ferrari (1), Nanci López (3), Fernanda Achinelly(1)*, Mariano Belaich (4), Daniel Ghiringhelli (4), Graciela Benintende (3), Diego Sauka (3)(1) Centro de Estudios Parasitológicos y de Vectores, CEPAVE, La Plata. Argentina. (2) Univ. Nac. de VillaMaría, Inst. A.P. de Ciencias Básicas y Aplicadas, Villa María, Argentina. (3) Instituto Nacional de TecnologíaAgropecuaria (INTA), Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola, Hurlingham, Argentina. (4) Lab. deIngeniería Genética y Biología Celular y Molecular, UNQ, Bernal, Argentina.El género Photorhabdus (Enterobacteriaceae) incluye bacterias gram-negativas móviles quemantienen una asociación simbiótica con nematodos parásitos de insectos de la familiaHeterorhabditidae. Una vez que el juvenil infectivo del nematodo (JI) invade un insecto, lasbacterias son liberadas produciendo toxinas y metabolitos secundarios que pueden matar alhospedador por septicemia dentro de las 48 h. El objetivo de este trabajo fue caracterizar unaislamiento de Photorhabdus spp. asociado a una población nativa de entomonematodos. Labacteria se aisló a partir del nematodo Heterorhabditis bacteriophora cepa SP, obtenido demuestras de suelo colectadas en un establecimiento hortícola de La Plata (Buenos Aires). Larvasdel coleóptero Tenebrio molitor se utilizaron como hospedador cebo para la obtención de losnematodos a partir de las muestras de suelo. Los cadáveres de los insectos infectados (48 h postmortem) se esterilizaron por inmersión en etanol 70% y se punzaron con microjeringa por losintersegmentos para obtener la bacteria. Una gota de hemolinfa se sembró en medio NBTA y semantuvieron a 29ºC durante 48 h. La caracterización de la cepa se realizó por secuenciación de suADN genómico total (Illumina), análisis de espectrofotometría de masas (MALDI-TOF), y pruebasbioquímicas API 20E, API20 NE y API 50CH. La patogenia fue evaluada en larvas de T. molitor pormicroinyección de bacterias en la hemolinfa. Para el ensamblado de las lecturas crudas de lasecuenciación genómica se utilizó el software Geneius R10. Se generaron 334 contigs con untamaño total de 5.294.507 bp y un porcentaje de G+C de 42,5%. La anotación genómica se llevó acabo utilizando el servidor RAST obteniéndose 5.165 secuencias codificantes (CDs), de los cuales25 mostraron homología con genes de toxinas insecticidas ya descritos y que serían losresponsables de la actividad insecticida de esta cepa contra T. molitor. Los resultados por MALDITOF(2.13) y el análisis de secuencia de los genes de 16s rRNA, gyrB, y glnA indicaron un 99,7 %de similitud con la cepa de referencia TTO1 P. luminescens subsp. laumondii. Sin embargo,presentó diferentes caracteres fenotípicos que nos hace pensar que esta cepa nativa de P.luminescens podría constituir una nueva subespecie. Estudios fenotípicos y genotípicoscomplementarios podrán o no confirmar esta hipótesis.