Estudio del efecto de un péptido análogo de INGAP-PP sobre la secreción de insulina y la expresión génica en islotes pancreáticos de rata.

ROMÁN, CAROLINA LISI; FARROMEQUE VÁSQUEZ, SHIRLEY; FLORES, LUIS EMILIO; ALGARAÑAZ, MACARENA; MENCUCCI, MARIA VICTORIA; GAGLIARDINO, JUAN JOSE; AHRTZ, LUCÍA; MAIZTEGUI, BÁRBARA

La Plata

Jornada; Jornadas de Investigación 2019, Medicina; 2019

Facultad de Ciencias Médicas, Universidad Nacional de La Plata

Introducción: La diabetes tipo 2 (DT2) se caracteriza por una resistencia de los tejidos periféricos a la acción de la insulina (insulinorresistencia -IR-) combinada con una capacidad limitada por parte de las células β pancreáticas de secretar insulina en respuesta al aumento de dicha demanda. La falla de la célula β se da por una disminución precoz y progresiva de su masa y su función secretora. El INGAP, o ?proteína asociada a la neogénesis insular?, es una proteína producida por el páncreas que modula positivamente tanto la masa de células β como la secreción de insulina en respuesta a diferentes secretagogos en animales normales y con diabetes. Nuestro grupo ha demostrado que estos mismos efectos también son alcanzados por un pentadecapéptido derivado del INGAP (INGAP-PP). Un ensayo clínico en el que administraron INGAP-PP a pacientes con DT1 y DT2, mostró que es capaz de provocar el aumento de secreción de péptidos C en personas con DT1 y mejorar el control glucémico en pacientes con DT2. Sin embargo, dicho ensayo fue interrumpido a los 90 días debido a la aparición de lesiones cutáneas en el punto de inyección. Actualmente se buscan análogos de INGAP-PP que logren el mismo efecto en dosis menores a fin de disminuir la frecuencia de inyecciones y la cantidad de péptido administrado en cada una de ellas. HTD4010 es un análogo de INGAP-PP con dos modificaciones en su estructura primaria que le otorgaron una mayor estabilidad en plasma, sin embargo, resta saber si las modificaciones introducidas en HTD4010 también lograron potenciar los efectos del INGAP-PP sobre la modulación de la masa celular β y la secreción de insulina estimulada por glucosa. Objetivos: determinar el efecto de HTD4010 sobre la secreción de insulina en islotes aislados y el efecto sobre la expresión génica de marcadores de los mecanismos que modulan la masa y la función secretora de células β. Materiales y métodos: Aislamos islotes por digestión con colagenasa de páncreas obtenidos de ratas Wistar macho adultas normales y los cultivamos 4 días en medio RPMI (5% SFB y glucosa 11 mM). Se conformaron 5 grupos experimentales: C: Control; I1: con el agregado al medio de cultivo de INGAP-PP 1ɥg/ml; H0.01: con el agregado de HTD4010 a una concentración 0,01ɥg/ml; H0.1: con HTD4010 a 0,1 ɥg/ml; y H1: con HTD4010 a 1ɥg/ml. Al cabo de los 4 días, islotes provenientes de cada grupo experimental fueron incubados por una hora en presencia de glucosa 3,3 ó 16,6 mM para determinar (por RIA) la secreción de insulina estimulada por glucosa (SIEG). El resto de los islotes provenientes de los grupos C, I1 y H0.01 se utilizó para aislar ARN total y determinar los niveles de expresión génica (por RT PCR en tiempo real) de genes relacionados con la función insular (Insulina y PDX1); con la señalización de insulina (el receptor de insulina [RI], sustrato del RI [IRS], PI3K, Akt) y con los mecanismos que regulan la masa celular: apoptosis (Caspasas 8, 9 y 3 y proteínas Bcl2 y Bad) y neogénesis insular (Ngn3). Resultado: En el ensayo de SIEG, no observamos diferencias entre los grupos en respuesta a una concentración basal de glucosa (3,3 mM). Sin embargo, cuando fueron incubados en presencia de glucosa 16,6 mM, los islotes de los grupos I1, H0.01, H0.1 y H1 secretaron significativamente más insulina que los de C (p