”Análisis de la expresión de genes asociados a la supervivencia en mutantes de Ensifer fredii”.

HERNANDEZ LOIS G; MARTINEZ ALCANTARA V; GALVÁN M; BALATTI P

Río Cuarto, Córdoba, Argentina

Congreso; VI Reunión Nacional Científico Técnica de Biología del suelo. VI Encuentro sobre Fijación Biológica de Nitrógeno.; 2007

Una de las características de los rizobios de particular importancia biotecnológica es la  capacidad de supervivencia de los mismos, puesto que en los inoculantes es fundamental que exista un número alto de células viables. Esto se debe a que la disponibilidad de nutrientes en el suelo o en la formulación, y  la presencia de organismos competidores atentan contra la supervivencia de los rizobios.En base a lo anterior se planteó el objetivo de este trabajo que es analizar a través de mutaciones transcripcionales, la expresión de un gen mutagenizado en Sinorhizobium fredii . En el mutante M25 se inactivó un gen de inanición por inserción de Tn5 (Tn5 B20 portador del gen reportero b-galactosidasa), Estudios preliminares sugieren que el gen inactivado esta asociado a la supervivencia, presentando homología con el gen RVS161 de Candida dubliniensis .Se determinaron los niveles de expresión del gen cuando el mutante fue cultivado en diferentes medios de cultivo, conteniendo diferentes fuentes de carbono, sales y concentración de extracto de levadura. Además, se determinó si un shock de temperatura a 42ºC durante 30 minutos  modifica la expresión del gen. Para esta reacción se midió la actividad b-galactosidasa, utilizando como sustrato ONPG.Ya se ha reportado que el gen inactivado se expresa en los bacteroides en activa fijación en el interior de los nódulos. Con el fin de definir el sitio y el momento de expresión del gen, se realizó un ensayo de inoculación tomando muestras a intervalos de tiempo desde etapas muy tempranas y se evaluó la expresión del gen, utilizando como sustrato para esta reacción X-Gal.Se determinó que el nivel  de expresión del gen es bajo, que el mismo es inducido por condiciones definidas de inanición y que el mismo no responde a la temperatura.