PUESTA A PUNTO DE UNA TÉCNICA IN VITRO PARA EVALUAR LAS ALTERACIONES HEMORREOLÓGICAS EN PACIENTES DIABÉTICOS

ANALÍA ALET; MARCUS VINÍCIUS BATISTA DA SILVA; BIBIANA RIQUELME; DANIELA ROCHA BARRETO

Rosario

Congreso; XX CONGRESO y XXXVIII REUNIÓN ANUAL DE LA SOCIEDAD DE BIOLOGÍA DE ROSARIO; 2018

SOCIEDAD DE BIOLOGÍA DE ROSARIO

En la diabetes (DBT), debido a la acción prolongada de la glucosa, la carga superficial de los glóbulosrojos (GR) se encuentra disminuida produciendo alteraciones en la agregación eritrocitaria, lo cualconduce a complicaciones microvasculares. El tiempo de exposición de la membrana eritrocitaria ala acción de la glucosa (glicación) es variable entre diferentes pacientes dando lugar a distintosgrados de alteraciones hemorreológicas. A fin de realizar un ensayo controlado se puso a punto unatécnica que permite estudiar la acción in vitro de la glucosa sobre los GR de dadores sanos. Además,esta técnica permitiría la posterior incubación con diversos agentes para analizar su posible acciónhemorreológica en pacientes diabéticos. Se emplearon muestras de sangre dadores sanos (n=2)obtenidas mediante punción venosa y anticoaguladas con EDTA. Luego de lavar los GR con PBS, selos incubó con una solución de glucosa al 1% en PBS y en PBS con albúmina sérica humana al 0,5%(PBSA), durante 2, 5, 10 y 22 hs a 36,5 ºC con agitación controlada. Luego de lavar los GR dos vecescon PBS, se resuspendieron al 0,25% en plasma autólogo para su observación microscópica. Lamorfología de los GR y de sus agregados se analizó por medio de imágenes digitales obtenidas pormicroscopía óptica (n=3 para cada condición), calculando los parámetros de agregación definidosen trabajos previos: el coeficiente de células aisladas (CCA) que analiza las diferencias en laagregación antes y después del tratamiento, y el Parámetro S que permite obtener unacuantificación de la agregación para cada imagen tomada. Los resultados mostraron que lasmuestras con 2 y 5 hs de incubación presentaron agregados con morfologías normales (rouleaux) yuna muy baja aparición de equinocitos al compararlo con mayores tiempos de incubación. Por otraparte, la adición de albúmina hizo que, para el mismo tiempo de incubación, la cantidad deequinocitos fuese aún menor, presentando ésta un efecto protector sobre la morfología de los GR.Dado que el tiempo de exposición de las proteínas a altas concentraciones de glucosa esdeterminante en el proceso de glicación y que no se observaron diferencias significativas en losparámetros de agregación de los GR entre estos dos tiempos (p>0.2, t-Student), se eligió comocondición de ensayo óptima la incubación de 5 horas utilizando PBSA. La puesta a punto de estatécnica permitirá realizar dos tratamientos consecutivos en la misma muestra minimizando el dañoocasionado a la membrana eritrocitaria por el proceso de incubación y sucesivos lavados. Estatécnica permite estudiar el efecto por la incubación con diversos agentes en GR glicados in vitro afin de modelizar las posibles alteraciones hemorreológicas en pacientes diabéticos.