Calibrations en microscopie a corrélation (FCS) pour la mesure de cinétique de mobilité des récepteurs TGF-beta dans le cadre de la différenciation des cellules souches mésenchymateuses en chondrocyte

DUMAS, DOMINIQUE; RIQUELME, BIBIANA DORIS; CASTELLINI, HORACIO; DE ISLA, N.; STOLTZ, JF

Clermont-Ferrand, Francia

Congreso; Congreso de la Asociación Francesa de Citometría; 2007

Asociación Francesa de Citometría

En raison de leurs capacités de différentiation, les Cellules Souches Mésenchymateuses (MSC de moelle osseuse) sont mises en œuvre dans de nombreuses stratégies en ingénierie tissulaire et présentent un intérêt dans le traitement potentiel substitutif de pathologies invalidantes (arthrose, infarctus, athérosclérose). Les MSC peuvent se différencier in vitro en cartilage sous l’effet de facteurs chimiques (TGF-b entre autres) et/ou mécaniques (compression). La microscopie à corrélation (FCS) est une méthode expérimentale de fluorescence qui permet de préciser la mobilité des récepteurs en milieu biologique, mais aussi de mesurer des concentrations locales ou bien la multimérisation de complexes moléculaires. La différenciation des MSC (mécanique ou chimique) s’accompagne t-elle d’une mobilité différente de certains récepteurs de surface? Pour tenter d’y répondre, ce travail préliminaire vise à préciser les calibrations nécessaires en FCS : comparaison des objectifs utilisés 60x/1.2 NA et 40/0.8 NA,  volumes optique de collection efficace, volume de confinement en fonction des irradiances des laser (488nm et 543 nm),  mesure des coefficients de diffusion  et cinétique d’association des anticorps primaires et secondaires utilisés pour le marquage des sous-unités I-QDot555 et sous-unité II- Alexa488 du récepteur TGF-b, récepteurs membranaires des MSC en culture.